[发明专利]一种噬菌体灭菌时化学抗菌剂筛选方法

摘要

本发明属于医疗卫生保健技术领域，具体涉及一种噬菌体灭菌时化学抗菌剂筛选方法。该方法具体包括制备双层固体培养基、接种病菌和噬菌体、加入抗菌剂、观察判定等步骤。本申请以部分特定菌株和噬菌体及部分广谱性的抗菌剂为代表，对于噬菌体与化学抗菌剂联用时的相互作用、相互影响进行了初步探讨，所提供的噬菌体灭菌时的化学抗菌剂的筛选方法，为筛选获得噬菌体与抗菌剂的最佳组合，以期获得最佳抗菌效果提供了较好的技术保障。总体而言，本发明所提供的化学抗菌剂的筛选方法，操作简单、结果稳定、可信度高，且容易观察和判断，因而在卫生保健领域具有较好地应用前景。

主权项

1.一种噬菌体灭菌时化学抗菌剂筛选方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：（1）制备双层固体培养基，其中底层为固体培养基，顶层为半固体培养基；（2）接种病菌和噬菌体，在步骤（1）中的顶层的半固体培养基中接种菌液和对应的噬菌体，混合均匀后，将半固体培养基倾倒于步骤（1）中的固体培养基中，并铺匀，室温凝固；所述菌液中菌体为肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌或大肠埃希菌，所述化学抗菌剂为84消毒液、双氧水、苯扎溴铵、石碳酸、碘伏或戊二醛；（3）加入化学抗菌剂，在步骤（2）中凝固后的双层培养基中滴加化学抗菌剂或采用粘贴具有一定浓度化学抗菌剂的纸片，培养并观察噬菌斑以进行判断；所用抗菌剂浓度高于有效杀菌浓度；判断时，依据噬菌体成斑率、噬菌斑大小和形态变化、化学抗菌剂抑菌区透明度变化三个方面单独或者联合对化学抗菌剂与噬菌斑合用的灭菌效果进行判定；依据噬菌体成斑率进行判断时，观察化学抗菌剂作用区域噬菌体成斑率的变化，成斑率增高即表明化学抗菌剂对噬菌体杀菌起促进作用，成斑率降低即表明化学抗菌剂对噬菌体杀菌起抑制作用；依据噬菌斑大小或形态变化进行判断时，观察化学抗菌剂作用区域噬菌斑，如果噬菌斑增大，或向消毒剂抑菌圈方向局部增大而被“拉长”，表明化学抗菌剂对噬菌体灭菌起促进作用；反之，观察化学抗菌剂作用区域噬菌斑，如果噬菌斑减小，或向消毒剂抑菌圈方向局部缩小而被“挤压”，表明化学抗菌剂对噬菌体灭菌起抑制作用；依据化学抗菌剂抑菌区透明度变化进行判断时，观察与噬菌斑相邻处化学抗菌剂抑菌区透明度的变化，如果与噬菌斑相邻处化学抗菌剂抑菌区透明度增加，表明化学抗菌剂对噬菌体灭菌起促进作用；反之，如果与噬菌斑相邻处化学抗菌剂抑菌区透明度降低，表明化学抗菌剂对噬菌体灭菌起抑制作用。