[发明专利]一种噬菌体灭菌时化学抗菌剂筛选方法

权利要求书

1.一种噬菌体灭菌时化学抗菌剂筛选方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

（1）制备双层固体培养基，其中底层为固体培养基，顶层为半固体培养基；

（2）接种病菌和噬菌体，在步骤（1）中的顶层的半固体培养基中接种菌液和对应的噬菌体，混合均匀后，将半固体培养基倾倒于步骤（1）中的固体培养基中，并铺匀，室温凝固；

所述菌液中菌体为肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌或大肠埃希菌，所述化学抗菌剂为84消毒液、双氧水、苯扎溴铵、石碳酸、碘伏或戊二醛；

（3）加入化学抗菌剂，在步骤（2）中凝固后的双层培养基中滴加化学抗菌剂或采用粘贴具有一定浓度化学抗菌剂的纸片，培养并观察噬菌斑以进行判断；

所用抗菌剂浓度高于有效杀菌浓度；

判断时，依据噬菌体成斑率、噬菌斑大小和形态变化、化学抗菌剂抑菌区透明度变化三个方面单独或者联合对化学抗菌剂与噬菌斑合用的灭菌效果进行判定；

依据噬菌体成斑率进行判断时，观察化学抗菌剂作用区域噬菌体成斑率的变化，成斑率增高即表明化学抗菌剂对噬菌体杀菌起促进作用，成斑率降低即表明化学抗菌剂对噬菌体杀菌起抑制作用；

依据噬菌斑大小或形态变化进行判断时，观察化学抗菌剂作用区域噬菌斑，如果噬菌斑增大，或向消毒剂抑菌圈方向局部增大而被“拉长”，表明化学抗菌剂对噬菌体灭菌起促进作用；反之，观察化学抗菌剂作用区域噬菌斑，如果噬菌斑减小，或向消毒剂抑菌圈方向局部缩小而被“挤压”，表明化学抗菌剂对噬菌体灭菌起抑制作用；

依据化学抗菌剂抑菌区透明度变化进行判断时，观察与噬菌斑相邻处化学抗菌剂抑菌区透明度的变化，如果与噬菌斑相邻处化学抗菌剂抑菌区透明度增加，表明化学抗菌剂对噬菌体灭菌起促进作用；反之，如果与噬菌斑相邻处化学抗菌剂抑菌区透明度降低，表明化学抗菌剂对噬菌体灭菌起抑制作用。

2.如权利要求1所述噬菌体灭菌时化学抗菌剂筛选方法，其特征在于，步骤（1）中所述固体培养基和半固体培养基均为LB培养基，固体培养基中琼脂粉用量为1.5%的质量比例，半固体培养基中琼脂粉用量为0.5%的质量比例。

3.如权利要求1所述噬菌体灭菌时化学抗菌剂筛选方法，其特征在于，步骤（1）中培养基用10mL/平皿盛放，步骤（2）中菌液浓度为10⁹ CFU/mL，接种量为100µL，步骤（3）中化学抗菌剂滴加量为5µL。