[发明专利]一种检测DNA中甲基化胞嘧啶的方法有效
| 申请号： | 201510605864.0 | 申请日： | 2015-09-22 |
| 公开（公告）号： | CN105154558B | 公开（公告）日： | 2018-10-09 |
| 发明（设计）人： | 周翔;王雅芬;毛伍祥;杜宇昊 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 张火春 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测DNA中甲基化胞嘧啶的方法。具体检测方法如下：将DNA链用亚硫酸氢钠进行处理，将DNA上不含甲基的胞嘧啶变为尿嘧啶；然后以亚硫酸氢钠处理后的DNA链为模板链，利用不对称PCR扩增出与模板链互补的DNA链；与模板链互补的DNA链先用钨酸钾‑过氧化氢混合液处理，将非双链区域的鸟嘌呤氧化损伤；再用哌啶进行热处理，使氧化损伤的鸟嘌呤的位置特异性断裂；将DNA链用冰乙醇沉淀旋干后上样至电泳槽，通过聚丙烯酰胺变性胶中DNA条带对应的鸟嘌呤的位置确定甲基化胞嘧啶的位置和个数；甲基化胞嘧啶为5‑甲基胞嘧啶和/或5‑羟甲基胞嘧啶。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 dna 甲基化 胞嘧啶 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测DNA中甲基化胞嘧啶的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将DNA链用亚硫酸氢钠进行处理，将DNA上不含甲基的胞嘧啶变为尿嘧啶；（2）以亚硫酸氢钠处理后的DNA链为模板链，利用不对称PCR扩增出与模板链互补的DNA链；（3）与模板链互补的DNA链先用钨酸钾‑过氧化氢混合液处理，将非双链区域的鸟嘌呤氧化损伤；再用哌啶进行热处理，使氧化损伤的鸟嘌呤的位置特异性断裂；（4）将步骤（3）处理后的DNA链用冰乙醇沉淀旋干后上样至电泳槽，通过聚丙烯酰胺变性胶中DNA条带对应的鸟嘌呤的位置确定甲基化胞嘧啶的位置和个数；所述的甲基化胞嘧啶为5‑甲基胞嘧啶和/或5‑羟甲基胞嘧啶。
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