[发明专利]一种百日咳抗原的分离纯化方法在审
| 申请号： | 201510595876.X | 申请日： | 2015-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN105175517A | 公开（公告）日： | 2015-12-23 |
| 发明（设计）人： | 张俊;李国顺;徐兴军;刘建凯 | 申请（专利权）人： | 北京民海生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/235 | 分类号： | C07K14/235;C07K1/16;A61K39/02;A61P31/04;A61P11/14 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 102600 北京市大兴区中关*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种百日咳抗原的分离纯化方法，采用硅藻土、羟基磷灰石作为柱层析材料，百日咳杆菌发酵液经浓缩调整电导处理后，经硅藻土富集百日咳抗原，再经羟基磷灰石纯化后得到百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)。经SDS-PAGE电泳检测，PT蛋白和FHA蛋白纯度均高于95％。本发明方法操作简单，抗原的纯度高，不仅大幅度降低生产成本而且显著提高产品的质量和收率，是一种简单、快速的百日咳抗原的分离纯化方法，取得良好的经济效益，具备优异的市场应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 百日咳 抗原 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种百日咳抗原的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将硅藻土装入层析柱中；(2)百日咳杆菌发酵液离心后取上清液，将上清液超滤浓缩为原体积的5％‑10％，并调整电导；(3)浓缩的上清液上样，先后用PB缓冲溶液、含TritonX‑100的PB缓冲溶液、PB缓冲溶液对层析柱进行平衡和杂蛋白的洗脱，再用含0.15‑0.25M NaCl的PB缓冲溶液洗脱层析柱，得到洗脱液1；(4)用含0.5‑1.0M NaCl的PB缓冲溶液对层析柱进行洗脱得到洗脱液2；(5)洗脱液1经羟基磷灰石层析柱，收集穿透液即为百日咳毒素；(6)洗脱液2经羟基磷灰石层析柱吸附后，先用PB溶液洗脱未结合蛋白、再用含NaCl的PB溶液对层析柱进行洗脱，收集的洗脱液即为百日咳丝状血凝素。
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