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[发明专利]一种破伤风类毒素的精制方法-CN201711308023.9在审
发明人：李世慧;韩俊杰;张萍;肖詹蓉;王珣;周第 -专利权人：北京北生研生物制品有限公司
申请日： 2017-12-11 - 公布日： 2018-05-08 - 主分类号： C07K14/33 文献下载
摘要：本发明提供一种破伤风类毒素的精制方法，其包括准备待纯化的破伤风类毒素原液；将破伤风类毒素原液加样于EMD DEAE(M)凝胶层析柱；采用平衡液对加样后的层析柱进行平衡，平衡后，采用洗脱液I洗脱所需的破伤风类毒素单体，收集含破伤风类毒素单体的洗脱液。本发明精制方法显著提高破伤风类毒素单体纯度，且其收率达40％以上，该方法获得的破伤风类毒素单体作为结合疫苗的载体蛋白能显著提高疫苗的免疫原性，为多糖‑蛋白质结合疫苗及其他以TT为联合疫苗组分的疫苗提供了更加安全有效的蛋白质。
一种破伤风类毒素精制方法

[发明专利]百日咳杆菌69KD外膜蛋白的纯化方法-CN201210027545.2无效
发明人： 肖詹蓉;王玲 -专利权人：北京天坛生物制品股份有限公司
申请日： 2012-02-08 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： C07K14/235 文献下载
摘要：本发明属于蛋白分离纯化领域，涉及百日咳杆菌的69KD外膜蛋白的工业化大规模分离纯化方法。所述方法包括：a.将百日咳杆菌CS菌体用含1mol/L至2mol/L氯化钠的pH8.8的缓冲液在40至60℃浸提30分钟至3小时，离心，收集上清，得到含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清；b.在含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到15％重量/体积至25％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，收集上清；c.在步骤b收集的上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到30％重量/体积至38％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，弃上清，收集沉淀；d.以Tris-HCl缓冲液溶解步骤c中收集的沉淀并透析除去硫酸铵；e.过DEAE sepharose离子交换柱，用线性梯度氯化钠浓度从0mol/L至1mol/L的缓冲液洗脱，收集目的蛋白。本发明的方法可以快速、简便、低成本纯化天然构象69KD外膜蛋白，从而可用于大规模工业制备天然构象69KD外膜蛋白。
百日咳杆菌 69 kd 膜蛋白纯化方法