[发明专利]快速克隆大鼠5-脂肪氧合酶cDNA 的方法在审
| 申请号： | 201510019638.4 | 申请日： | 2015-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN104560957A | 公开（公告）日： | 2015-04-29 |
| 发明（设计）人： | 董晓;宋亚峰;党书毅;周明;王俊峰;段班燕;熊胜梅 | 申请（专利权）人： | 董晓;十堰市太和医院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/53 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 442000 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了快速克隆大鼠5-脂肪氧合酶cDNA的方法。分别用oligo(dT)和随机引物逆转录大鼠mRNA，将cDNA产物混合；在目的cDNA片段上选择分段扩增的酶切位点，在此位点前后选取序列设计两对引物，分别用两对引物对混合的cDNA产物进行分段扩增，两片段3’端加A后分别与不含分段扩增的酶切位点的T载体连接，选择克隆方向正确的载体，将含有两个cDNA片段的载体分别用相应的限制性内切酶酶切后通过定向克隆的方法将两片段连接，获得全长大鼠5-脂肪氧合酶cDNA。本发明方法克服了mRNA表达量低时难以获得cDNA的情况，大大降低了直接逆转录获得全长cDNA编码序列的操作难度。 | ||
| 搜索关键词： | 快速 克隆 大鼠 脂肪 氧合酶 cdna 方法 | ||
【主权项】：
一种克隆长片段cDNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取mRNA，分别用oligo(dT)和随机引物逆转录mRNA，将两种cDNA产物混合；(2)在目的cDNA片段中间位置上选择酶切位点作为分段扩增的位点，在此位点前后选取序列设计两对引物；(3)分别用步骤(2)中的两种引物对步骤(1)获得的混合cDNA进行分段扩增，选择不含步骤(2)中用于分段扩增酶切位点的T载体，用T‑A连接的方法将两个片段分别克隆入T载体，再使用特定的限制性内切酶酶切两种载体，通过定向克隆的方法将两个片段连接。
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