[发明专利]一种纳豆激酶活性测定方法

摘要

本发明提供了一种纳豆激酶活性测定方法，利用纳豆激酶具有纤溶活性的特性，在凝血酶与血纤维蛋白原作用后，会产生凝固状的血纤维蛋白，此时再加入纳豆激酶溶液，纳豆激酶会作用于血纤维蛋白，产生降解物，该降解物在波长275nm处吸光度的大小来推测酶活力的大小，是一种简单快速检测纳豆激酶的方法，可大批量简单方便的测定纳豆激酶的活性。

主权项

一种纳豆激酶活性测定方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)比色管中加入硼酸缓冲液，再加入血纤维蛋白原液，振摇均匀，在37℃水浴恒温5分钟，其中，硼酸缓冲液与血纤维蛋白原液的体积比为7:1‑3；(2)加入凝血酶液，其中，凝血酶液与血纤维蛋白原液的体积比为1:3‑5，振摇均匀，在35‑40℃水浴恒温5‑15分钟；(3)单号管中先加入三氯乙酸溶液，终止反应，振摇均匀，在35‑40℃水浴恒温15‑30分钟；双号管中先加入纳豆样品稀释液，振摇均匀，在35‑40℃水浴恒温50‑80分钟，其中，所述三氯乙酸溶液、纳豆样品稀释液与血纤维蛋白原液的体积比为20：1：3‑5；(4)单号管中加入纳豆样品稀释液，振摇均匀，在35‑40℃水浴恒温50‑80分钟；双号管中加入三氯乙酸溶液，终止反应，振摇均匀，在35‑40℃水浴恒温15‑30分钟，其中，所述三氯乙酸溶液、纳豆样品稀释液与血纤维蛋白原液的体积比为20：1：3‑5；(5)反应结束后振摇均匀，将反应液于10000‑14000rpm，离心处理5‑6分钟，取上清液测定275nm处的吸光度值，经计算即得纳豆激酶活性；(6)计算公式：NK活性(FU/g)＝(AT－AB)×D/(0.01×60×0.1)其中，AT：实验组‑双号管吸光度值；AB：对照组‑单号管吸光度值；D：样品稀释倍数。