[发明专利]菲律宾蛤仔抗菌蛋白的制备方法有效
| 申请号： | 201410196291.6 | 申请日： | 2014-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN104087567B | 公开（公告）日： | 2017-04-12 |
| 发明（设计）人： | 丁鉴锋;闫喜武;杨凤;赵力强;秦艳杰 | 申请（专利权）人： | 大连海洋大学;丁鉴锋 |
| 主分类号： | C12N9/36 | 分类号： | C12N9/36;C12N15/56;C12N15/70 |
| 代理公司： | 大连非凡专利事务所21220 | 代理人： | 闪红霞 |
| 地址： | 116000 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开一种菲律宾蛤仔抗菌蛋白的制备方法，以如SEQ ID NO1 所示cDNA为模板、以具有EcoR I 和NotⅠ两个酶切位点的PCR反应引物进行PCR反应；上游引物EcoR I5'‑ GAATTCATGGCTTGGCTGACAGCATCTG ‑3' 下游引物NotⅠ5'‑ GCGGCCGCTTATTTGTCTTTAACAGCTCTCATTCTGC ‑3'；将PCR反应产物与克隆载体相接，并转化到感受态细胞；提取所得克隆和表达载体质粒，分别用EcoR I和Not I双酶切，胶回收目的片段后用连接酶连接，再转化到感受态细胞；提取阳性克隆并将所得阳性克隆进行IPTG诱导表达；对表达的重组蛋白进行提取并纯化。 | ||
| 搜索关键词： | 菲律宾 抗菌 蛋白 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种菲律宾蛤仔抗菌蛋白的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：a. 提取菲律宾蛤仔总RNA；b. 反转录合成菲律宾蛤仔噬菌体型溶菌酶基因成熟肽cDNA，如SEQ ID NO：1 所示；c. 以所得到的cDNA为模板、以具有EcoR I 和NotⅠ两个酶切位点的PCR反应引物进行PCR反应；所述PCR反应引物序列如下：上游引物EcoR I：5'‑ GAATTCATGGCTTGGCTGACAGCATCTG ‑3'下游引物NotⅠ：5'‑ GCGGCCGCTTATTTGTCTTTAACAGCTCTCATTCTGC ‑3'd. 将PCR反应产物与克隆载体相接，并转化到感受态细胞；e. 提取所得克隆和表达载体质粒，分别用EcoR I和Not I双酶切，胶回收目的片段后用连接酶连接，再转化到感受态细胞；f. 提取阳性克隆并以所得阳性克隆构建转化产物，对所得转化产物进行IPTG诱导表达；g. 对表达的重组蛋白进行提取并纯化。
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