[发明专利]一种鹿蹄草细胞悬浮培养方法

摘要

本发明涉及一种植物细胞悬浮培养方法，特别是一种鹿蹄草细胞悬浮方法，属生物技术领域。本发明鹿蹄草细胞悬浮培养方法包括外植体的选择与灭菌，愈伤组织诱导，细胞悬浮培养，培养细胞的扩大繁殖四个步骤。本发明可在较短时间内获得大量鹿蹄草悬浮细胞，解决鹿蹄草资源需求问题，具有生产周期短，增殖速度快的优点，可用于药用植物成分的提取和制药工业。

主权项

一种鹿蹄草细胞悬浮培养方法，其特征在于按照如下步骤进行：(1)外植体的选择与灭菌：以鹿蹄草叶片作为外植体。采集健康无病害的鹿蹄草叶片，无菌水清洗2遍，在75％乙醇中浸泡1～3min，随后放入0.1％～0.15％的HgCl2溶液中浸泡20～40s，随后用无菌水清洗5遍。所有操作在超净工作台中进行。(2)愈伤组织诱导：在超净工作台中，将灭菌后的鹿蹄草叶片用无菌手术刀切成边长3～8mm的小叶片，接种到愈伤组织诱导培养基上，培养温度为20～30℃，每天光照0～16h，光照强度1000～30001x。(3)细胞悬浮培养：在超净工作台中，将生长良好的愈伤组织用无菌研钵碾碎分散，接种到悬浮细胞液体培养基中振荡培养，接种量为每100mL培养基中加入10～50g愈伤组织，培养温度为20～30℃，每天光照0～16h，光照强度1000～30001x，振荡速度30～100rpm。培养10～15d。(4)培养细胞的扩大繁殖：在无菌条件下，将步骤(3)中所得鹿蹄草悬浮细胞按照体积比1∶10～1∶15的比例接种至增殖培养基中，振荡培养，培养温度为20～30℃，每天光照0～16h，光照强度1000～30001x，振荡速度30～100rpm。