[发明专利]一种制备DcR3抗原的方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种制备DcR3抗原的方法。本发明的制备方法为：从人DcR3基因全长ORF克隆上扩增获得DcR3基因；将DcR3基因通过双酶切位点Hind3和NCO1插入pET-32a（+）表达载体中获得含有DcR3基因的重组质粒；通过降低培养温度和诱导剂的浓度，增加培养时间等方法，获得可溶性DcR3，并通过梯度咪唑洗脱液进行洗脱的简单纯化后，获得较纯的DcR3抗原。本发明通过降低培养温度和诱导剂的浓度，增加培养时间等方法，获得可溶性DcR3，并通过简单的纯化后，获得较高纯度的DcR3抗原。

主权项

一种制备DcR3抗原的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）PCR扩增DcR3基因：根据DcR3基因的序列设计引物，以人DcR3基因全长ORF克隆为模板，扩增DcR3基因；（2）将DcR3基因插入pET‑32a（+）表达载体：用Hind3和NCO1分别双酶切DcR3基因和pET‑32a（+）后用T4DNA连接酶进行连接，然后转化到大肠杆菌BL21中，转化菌命名为dBL；提取转化菌的重组质粒，进行双酶切以及测序验证；（3）DcR3基因的可溶性表达：将dBL单克隆接种于LB培养基中过夜培养，得到菌液；取菌液加到LB培养基中培养至OD600=0.6时，加入IPTG至浓度为0.1‑0.3mM，培养后离心，取沉淀，用PBS重悬；破碎后离心，取上清液进行蛋白电泳，得到可溶性DcR3；（4）DcR3的纯化：按DcR3基因的可溶性表达条件培养dBL，破碎后将上清液与镍树脂混合，用咪唑洗脱液进行洗脱，取咪唑洗脱液进行蛋白电泳，得到DcR3蛋白。