[发明专利]一种提高川贝母细胞同步化的诱导方法

摘要

本发明公开了一种提高川贝母细胞同步化的诱导方法，属于生物技术领域。本发明方法主要采用氦气阻断法与低温诱导共同对川贝母有丝分裂进行同步化诱导，该诱导方法能有效地提高其后续的多倍体诱导率，克服了川贝母种植过程中出现品种退化的问题，能明显缩短种植周期，进而提高川贝母的产量及药用成分含量，该方法步骤简单，工艺稳定，适用于在工业化大生产。

主权项

一种提高川贝母细胞同步化的诱导方法，其特征在于：它包括以下步骤：S1：将由川贝母鳞片叶诱导产生的愈伤组织切成0.5～2cm2的大小转接到产生疏松愈伤组织的培养基中进行培养，pH值为5.6～6.5，培养条件：温度20～25℃，每天光照8～12h，光照强度为1000～1800lx；S2：将S1步骤获得的疏松愈伤组织按5～20g·L‑1的接种量接入MS+KT 0.5～1.0mg·L‑1+2，4‑D 0.5～2.0mg·L‑1+蔗糖10～25g·L‑1的液体培养基中进行悬浮培养，pH值为5.5～6.0，培养条件：温度18～22℃，每天光照6～10h，光照强度为600～1000lx，摇床转速为80～100r/min的条件下，进行20～30天继代培养1次；S3：在S2步骤的悬浮培养过程中，选取在第三次继代培养基中添加1～3mmol/L的腺嘌呤核苷培养处理细胞10～18h，再更换在不加腺嘌呤核苷的培养基中继续培养1周；接着向培养基中通入氦气并保持压力为50～80磅/英寸2，在20～25℃的培养条件下培养12～24h后放出氦气；S4：将S3步骤处理完毕的细胞转接入MS+NAA 0.1～0.5mg·L‑1+KT 0.1～0.5mg·L‑1+蔗糖20～40g·L‑1+甘油5～20%的液体培养基中，在1～5℃的低温条件下培养12～24h后再放在温度为18～22℃条件下恢复培养24～48h。