[发明专利]山羊IGFBP3基因cDNA编码序列克隆的方法无效
| 申请号： | 201310294920.4 | 申请日： | 2013-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN104293766A | 公开（公告）日： | 2015-01-21 |
| 发明（设计）人： | 占思远;张红平;李利;王林杰;仲涛 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 625014 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种山羊IGFBP3基因cDNA编码序列克隆的方法，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，包括以下步骤：A1、提取山羊背最长肌组织中的总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA；A2、引物的设计和PCR扩增：以绵羊该基因的序列为模板在起始密码子上游区域和终止密码子的下游区域设计引物，设计的引物为：正向引物：5'AGCTCGCTGCCGCCCAGT3'，反向引物：5'GCTGATCATGTCCTTGGCAG3'；A3、PCR产物的纯化回收；A4、克隆。本发明提供了一种简捷的获取山羊IGFBP3基因cDNA编码序列的方法，为进一步研究该基因在山羊生长发育过程的作用奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 山羊 igfbp3 基因 cdna 编码 序列 克隆 方法 | ||
【主权项】：
山羊IGFBP3基因cDNA编码序列克隆的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：从山羊肌肉组织样品中提取总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA；步骤二：扩增引物的设计及PCR反应：以绵羊该基因的序列为模板在起始密码子上游区域和终止密码子的下游区域设计引物；设计的引物为：正向引物：5' AGCTCGCTGCCGCCCAGT 3'反向引物：5' GCTGATCATGTCCTTGGCAG 3'用cDNA为模板先进行梯度PCR反应，退火温度范围选择50℃到60℃共8个温度点，优化普通PCR的条件。
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