[发明专利]光和细菌液固双重发酵高密度微生态制剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种光和细菌液固双重发酵高密度微生态制剂的制备方法，包括平板培养基培养，试管培养，三角瓶培养，二级种子的制备，三级种子的制备，成品的制备等步骤。采用低浓度的有机培养基诸如蛋白胨、酵母膏及氮磷钾盐保证了培养出的光合细菌颜色纯正，亮丽，不会变淡、变绿、变黑等；采用低浓度的氮源和碳源保证了低成本，更能适于工业化大规模生产；光合细菌生长速度快，菌液浓度高；其制备工艺简单并易于控制，不易染杂菌，菌株浓度高，后加工成本低，生产环境友好。

主权项

一种光和细菌液固双重发酵高密度微生态制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：一、平板培养，光合细菌保存菌种划线接种至平板培养基，121℃灭菌30分钟，32℃培养24h；二、试管接种，取发育健壮、菌落典型的菌株接种10ml，121℃灭菌30分钟，32℃培养24h； 三、三角瓶接种100ml，121℃灭菌30分钟，32℃培养24h；四、三角瓶接种1000ml，121℃灭菌30分钟，32℃培养24h；五、二级种子的制备，将光合细菌于30℃，通气量为0.24m³/h条件下培养24h，得二级菌种9L；六、三级种子的制备，先向500L的液体发酵灌内加入100L饮用水，将称量好的蛋白胨90g，酵母膏90g，乙酸钠180g，碳酸氢钠180g，氯化铵180g，氯化镁180g，磷酸氢二钾180g，葡萄糖3.6kg投入到发酵灌，搅拌10分钟至全部溶解，然后停止搅拌，加饮用水至180L，定完液位后，开启搅拌，然后打开蒸汽阀升温至100℃，排冷空气，排掉冷空气后继续升温至121℃保持30分钟，灭菌结束，冷却，备用，当培养基冷却至30℃，将光合细菌二级种子9L通过压差接种的方式，接种到500L发酵罐中，30℃，通气量为9.6m³/h条件下发酵48h，得三级菌种约200L；七、将固体基质和培养基原料加入到固体发酵罐中，1.0MPa，121℃灭菌半小时，等培养基冷却至30℃时，将液体菌种与固体发酵基质按4：10混合，将混合均匀的固体发酵料盛入发酵浅盘，铺料厚度4—5cm左右，置于发酵间，使发酵料好氧发酵，室温保持在30℃左右，发酵时间为6天左右，发酵期间每天翻盘两次。