[发明专利]一种β-D-呋喃果糖苷酶的固态发酵生产方法

摘要

本发明涉及β-D-呋喃果糖苷酶（β-D-fructofuranosidase,EC 3.1.2.26，简写为FFase）的制备方法，尤其是一种β-D-呋喃果糖苷酶的固态发酵生产方法。其特点是，包括如下步骤：（1）孢子液的准备；（2）种子的扩大培养；（3）固态发酵产β-D-呋喃果糖苷酶；（4）后处理获得β-D-呋喃果糖苷酶。本发明方法克服了FFase液态发酵的缺点，提供一种FFase的固态发酵生产方法，用固态发酵的方法为低聚果糖的大规模工业生产提供优质酶源。优点是：（1）固态发酵培养基以甘蔗渣、稻壳、大豆饼等为原料，原料价格低廉；（2）发酵周期短，工艺设备简单，降低成本，益于工业化生产。

主权项

一种β‑D‑呋喃果糖苷酶的固态发酵生产方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）孢子液的准备：首先制备试管斜面培养基，将黑曲霉接种到制备好的试管斜面培养基上，在25‑32℃培养3～5天至长出孢子，然后向斜面上加入生理盐水洗涤菌丝体，获得孢子液；（2）种子的扩大培养：制备液体种子培养基，按照体积比2%～5%的接种量将步骤（1）得到的孢子液接入液体种子培养基，于25～32℃、转速180～220rpm的摇床上扩大培养2～4天，获得种子液；（3）固态发酵产β‑D‑呋喃果糖苷酶：制备固态发酵培养基，将种子液接入制备好的固态发酵培养基，充分搅拌混合，然后在料层厚度1～3厘米、湿度45%～80%、发酵温度25‑35℃下静置发酵3～5天；（4）后处理获得β‑D‑呋喃果糖苷酶：取步骤（3）得到的固体培养物，加入其6‑10倍重量的50毫摩尔pH 5.5的柠檬酸盐缓冲液，用组织捣碎机粉碎，再搅拌浸提至少4小时，经过离心或过滤使固液分离，得到的上清液或滤液即为粗β‑D‑呋喃果糖苷酶酶液。