[发明专利]一种用于检测大豆疫霉的LAMP引物、试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种用于检测大豆疫霉的LAMP引物、试剂盒及其检测方法：提取待检测物DNA，取1μL溶液作为反应模板，取试剂盒中的溶液24μL加入200μL反应小管中，模板混匀后放入65℃恒温水浴中，30-60min内观察小管中溶液颜色的变化，如果颜色由浅紫色变为天蓝色，则说明待检物中含有大豆疫霉，如果溶液颜色没有变化，说明待检物中不含有大豆疫霉。与传统的只是跟据形态特征来确定大豆疫霉的检测技术相比较，本发明具有更高的准确性、灵敏度和时效性。本发明通过实验验证，在不同的疫霉种之间，大豆疫霉的检出率为100%，准确性及特异性高；本发明最低可以检测出10pgDNA含量的样品，灵敏度高；本发明的耗时只要30—60min，加上样品的富集及DNA的提取，最快只需要半个工作日，时效性高。

主权项

一种用于检测大豆疫霉的LAMP引物、试剂盒，其特征在于所述的LAMP引物有3对，分别是：F3: CCTTGTCTGCCCTCTCGAB3: AGAAGCGTACACCCACCAFIP: GAATTTTCTGGGCGGGACAACGCCAGGATGGCTAAGGTTTCCBIP: GAGCTGGACGGCAAGACCATCCATAAGTGCGCTTAACCGGLF: GCACAATATTGTCAGCAACTGGATCLB: CAAGCTCCAGATTGTACGTTCA；所述的试剂盒、试剂及其浓度为：20 mM Tris‑HCl (pH 8.8)、10 mM (NH4)2SO4、50 mM KCl、8 mM MgSO4、0.1 % Tween‑20、 0.8M Betaine, 1.4M dNTPs, LAMP所用的大豆疫霉特异性引物0.2μM F3, 0.2μM B3, 1.6μM FIP, 1.6μM BIP, 0.8μM LF, 0.8μM LB, 150μM Hydroxynapthol Blue, 8U Bst DNA polymerase, 使用超纯水配制成1mL检测溶液，保存期为1年。