[发明专利]发酵法木聚糖酶的一种制备方法

摘要

本发明涉及发酵法木聚糖酶的一种制备方法，首先将从土壤样品中分离的木聚糖酶产生菌株mtr127用低能离子注入和DEs进行诱变，筛选出高酶活菌株MJT36；其次将MJT36孢子悬液进行发酵，发酵后粗酶液经过分级沉淀、疏水层析、凝胶过滤层析、阴离子交换柱层析等技术进行纯化，冷冻干燥后制得木聚糖酶，活性达到100000IU/g以上。本发明选育的菌株遗传性能稳定、产酶活力高、工艺流程合理，提供了一种生产上可行的木聚糖酶的制备方法。

主权项

发酵法木聚糖酶的一种制备方法，主要包括以下步骤：1)复合诱变：将从土壤样品中分离的木聚糖酶产生菌株mtr127用无菌水制成孢子悬浮液，采用低能离子注入和DES进行诱变。经培养后，进行初筛和复筛，最终筛选出高酶活菌株MJT36(CGMCC No.6410)，并进行菌种的鉴定，保藏和传代试验。2)发酵：将MJT36孢子悬液接入装有产酶培养基的三角瓶中，摇瓶振荡培养。3)酶的分离纯化：①硫酸铵沉淀：发酵液低温离心后收集上清液(粗酶液)，加入固体硫酸铵，过夜后离心，收集沉淀；②疏水层析：用磷酸盐缓冲液溶解上述沉淀，加入固体硫酸铵，离心后上清液加入到用起始缓冲液平衡好的疏水柱中，硫酸铵缓冲液阶段洗脱，收集具有酶活性的酶液；③凝胶过滤层析：将收集的酶液用硫酸铵沉淀酶蛋白，离心后沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，加入到用磷酸盐缓冲液平衡好的分子筛柱中，同一缓冲液洗脱和收集，检测酶活，合并具有较高酶活性的洗脱液；④阴离子交换层析：将收集的酶液用磷酸盐缓冲液透析，浓缩后上阴离子交换柱，用含NaCl的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱和分部收集，合并具有较高酶活性的洗脱液。4)冷冻干燥：洗脱液用SephadexG‑25脱盐、聚乙二醇浓缩，冷冻干燥后制得木聚糖酶，活性达到100000IU/g以上。