[发明专利]大分子活性胶原蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种大分子活性胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：鱼皮的预处理；活性胶原蛋白的提取；活性胶原蛋白溶液的纯化。本发明通过超声波、乙酸和复合酶的协同作用提取胶原蛋白，并综合运用盐析、透析和超滤技术制得大分子活性胶原蛋白溶液，并能稳定存在。

主权项

一种大分子活性胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：一、鱼皮的预处理       选取新鲜鱼皮，100重量份，水洗去肉后，加入20‑30% NaCI(0.05M Tris‑HCI，pH7.5)溶液中(1:20‑40，w/v)均质5‑10min，用转速为10000‑15000rpm高速冷冻离心机离心10‑25min，取沉淀，重复上述操作，直到没有浮游脂肪和气泡产生，然后用去离子水清洗；二、活性胶原蛋白的提取       将预处理后的鱼皮加入预冷的去离子水中（1:50‑100，w/v），冰浴，加入乙酸至0.5‑1.0M超声10‑25min，超声波功率300‑600W，加入0.1‑0.5重量份胃蛋白酶、酸性酶3350和木瓜蛋白酶中的一种或数种，酶解5‑8h，离心，取上清，所得沉淀加去离子水（1:50‑100），调pH值至中性，加入0.1‑0.5重量份中性蛋白酶、菠萝蛋白酶中的一种或两种，酶解3‑6h，离心，取上清，合并两份上清，得胶原蛋白溶液；三、活性胶原蛋白溶液的纯化选孔径为10‑50nm的超滤膜浓缩上述胶原蛋白溶液，加入NaCl至终浓度为0.5‑1.3M，盐析过夜，然后离心10‑30min，取沉淀，沉淀再次用0.5‑1M乙酸溶解后，离心1‑2h，取上清，对0.1‑0.2M乙酸透析脱盐，用100‑200nm孔径的超滤膜去除小分子物质和多肽，得到浓度为20‑50%的大分子活性胶原蛋白溶液。