[发明专利]一种提高微载体重复使用次数的回收处理方法

摘要

本发明涉及一种微载体的回收处理方法，具体涉及一种提高微载体重复使用次数的回收处理方法；其包括筛选、溶剂稀释、搅拌、过滤、氢氧化钠处理、调节pH值、酶消化处理、冲洗及灭菌处理步骤。本发明所述的提高微载体重复使用次数的回收处理方法采用多个步骤结合，达到最佳的处理效果，其不仅明显增加微载的使用次数，节约了使用成本；而且经过多次处理后的微载体使用时对细胞在微载体上贴壁生长情况并没出现明显影响。本发明所述的处理方法可广泛适用各种微载体的回收。

主权项

一种提高微载体重复使用次数的回收处理方法，其特征在于：其包括以下步骤（1）筛选：使用60‑300目的筛网过滤除去溶液，回收微载体，并放置到容器中；（2）溶剂稀释：向上述装有微载体的容器中加入2‑5倍于微载体体积的浓度为0.1M的并含有浓度为10‑50mM的EDTA的PBS溶液，再用医用酒精稀释至载体的体积浓度至20%；（3）搅拌：将上述溶液进行中速搅拌；（4）过滤：搅拌结束后，用筛网过滤回收微载体，同时从溶液中取出从微载体上脱落的的细胞碎片；（5）氢氧化钠处理：将上述过滤后收集的微载体放入到容器中，然后加入1‑2倍于微载体体积的浓度为0.1‑1M氢氧化钠溶液，加入同时搅拌，搅拌过程中用显微镜检测微载体表面，至贴在微载体表面80‑90%细胞碎片脱落，停止搅拌；（6）调节pH值：搅拌停止后用筛网回收微载体，并用0.1M的PBS冲洗载体，至溶液的pH值为6.5‑7.5；（7）酶消化处理：将上述微载体转入到容器中，加入1‑2倍于微载体体积的蛋白酶溶液进行消化处理，消化期间不断搅拌，并用显微镜观察微载体表面，至微载体表面干净后停止消化；（8）冲洗：将上述消化完成后的微载体用浓度为0.1M的PBS冲洗，直至PBS冲洗液中不再出现细胞碎片；（9）灭菌处理：将上述冲洗后的微载体进行灭菌处理，之后用于细胞培养。