[发明专利]检测猪链球菌2型的基因芯片的制备及其应用方法

摘要

本发明涉及用于检测猪链球菌2型的基因芯片的制备及其应用方法，可有效解决现有检测设备及方法耗时长，投入大的问题，其技术方案是：设计并合成引物和探针，用灭菌水溶解合成好的探针，用基因芯片点样仪按预先设定好的程序在醛基化基片上接触式点样，制备用于检测猪链球菌2型的基因芯片，其使用方法是，提取待测猪链球菌2型细菌的基因组DNA，采用不对称PCR制备杂交用PCR产物，与制备好的基因芯片杂交，经洗涤与干燥后，将芯片置于激光共聚焦扫描仪上扫描，分析结果，本发明操作简便易行，省去了已点样芯片的水化处理和预杂交步骤，杂交只需半小时，大大节省了时间，采用5μm/L的探针浓度就可以达到信号强度，检测成本低，可用于大规模检测。

主权项

一种用于检测猪链球菌2型的基因芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）设计引物和探针：以猪链球菌2型的cps2J基因序列为靶序列，设计特异性引物和探针，上游引物：5’‑TGGAATACGCAGAGCAAGAT‑3’，下游引物：5’Cy3‑AGCAAGTAACCCTCCCG ACA‑3’，探针：5’NH2‑TTTTTTTTTTTTTTTT‑ACGGTATCAAAAATAGCACAGCAAA‑3’，在下游引物5’端用Cy3进行荧光标记，探针的5’端进行氨基化修饰，修饰氨基和探针之间加上16个T；（2）按常规方法对引物和探针进行合成；（3）基因芯片的制备：用灭菌水溶解合成好的探针，用基因芯片点样仪（按预先设定好的程序）在醛基化基片上接触式点样，点样完毕后将芯片静置于25‑30℃烘箱干燥过夜8‑12小时。