[发明专利]一种吡咯喹啉醌依赖型葡萄糖脱氢酶的热稳定性突变体及其高通量筛选方法有效
| 申请号： | 201210054983.8 | 申请日： | 2012-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN102559624A | 公开（公告）日： | 2012-07-11 |
| 发明（设计）人： | 徐志南;于怡;黄磊;朱建忠;杨叶东 | 申请（专利权）人： | 浙江德清汇宁生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N1/15;C12Q1/54;C12Q1/32;C12M1/34;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州丰禾专利事务所有限公司 33214 | 代理人： | 张欢勇 |
| 地址： | 313200 浙江省湖州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种定向改造可溶性吡咯喹啉醌依赖型葡萄糖脱氢酶(s-GDH)的分子结构，并采用高通量技术筛选热稳定性突变体的方法。其特征在于：通过易错PCR构建s-GDH的高容量突变文库，利用浸有有色底物的滤纸在菌落平板上进行原位筛选，并结合菌落直接转化法，获得s-GDH热稳定性提高的突变体。与野生型s-GDH相比，所述的s-GDH突变体的热稳定性获得了显著提高。得到高热稳定性的可溶性吡咯喹啉醌依赖型葡萄糖脱氢酶为进一步扩大葡萄糖脱氢酶的应用范围奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 吡咯 喹啉 依赖 葡萄糖 脱氢酶 热稳定性 突变体 及其 通量 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种热稳定性提高的s‑GDH突变体，其特征在于野生型s‑GDH位于111，263，270，331，347，416位中的氨基酸中有一个或多个被取代，其中这些位置对应于由醋酸钙不动杆菌Acinetobactercalcoaceticus L.M.D.79.41的s‑GDH野生型序列已知的氨基酸位置。
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