[发明专利]在哺乳动物细胞中高效表达猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的方法有效
| 申请号： | 201210018722.0 | 申请日： | 2012-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN102586326A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 李龙;于涟;方立 | 申请（专利权）人： | 杭州贝尔塔生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310014 浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种在哺乳动物细胞中高效表达猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的方法。该方法通过抑制猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的泛化作用(Ubiquitination)，增强其稳定性，从而提高病毒蛋白在哺乳动物细胞中表达水平。方法的步骤为：1）猪圆环病毒2型SX04株全基因组序列的克隆；2）含有猪圆环病毒2型（PCV2）核衣壳蛋白基因的真核表达质粒的构建；3）将上述质粒转染猪肾细胞PK15，转染后24小时，在细胞培养液中加入MG132；4）继续培养48小时后，收集细胞，免疫印迹检测表达蛋白。相对于普通的真核表达方法，该方法可有效稳定真核细胞中的PCV2核衣壳蛋白。转染后72小时的蛋白免疫印迹检测显示，本专利使用的方法，可最高提高PCV2核衣壳蛋白的表达量在20倍左右。 | ||
| 搜索关键词： | 哺乳动物 细胞 高效 表达 圆环 病毒 型核衣壳 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种在哺乳动物细胞中高效表达猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的方法，其特征在于，方法的步骤为：1）猪圆环病毒2型 SX04株全基因组序列的克隆；2）含有猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因的真核表达质粒pCI‑PCVCapHA的构建；3）将pCI‑PCVCapHA转染猪肾细胞PK15，转染后24小时，在细胞培养液中加入MG132；4）继续培养48小时后，通过抑制蛋白酶体的活性，稳定真核细胞中的猪圆环病毒2型核衣壳蛋白，收集细胞，免疫印迹检测表达蛋白。
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