[发明专利]一种从酿酒酵母细胞中高效提取高分子量基因组的方法

摘要

一种从酿酒酵母细胞中高效提取高分子量基因组的方法，包括采用lyticase破壁、蛋白酶k与RNase除去组蛋白和RNA、氯仿抽提、沉淀、溶解。本发明从影响酿酒酵母基因组提取的质和量入手，将破壁和去除蛋白、RNA的过程分开，分别采用不同的缓冲液及添加还原剂来保证破壁的效率和除去杂质的效果。在工艺过程上进行了更细致的优化，增加了抽提的次数，使基因组更加完整并提高了纯度。

主权项

一种从酿酒酵母细胞中高效提取高分子量基因组的方法，其特征在于：包括破壁、去除组蛋白和RNA、抽提、沉淀、溶解，具体工艺过程如下：破壁：用500μl的山梨醇缓冲液悬浮酿酒酵母，加入40μl、1000U/ml的lyticase和1μl β‑巯基乙醇，混匀后37℃孵育3h。去除组蛋白和RNA：8000r/min 1min离心弃上清(加速要慢)，加500μlTE缓冲液(pH8.0)，混匀后加50μl、10％SDS，加入10μl、200mg/ml蛋白酶k，再加入10μl、10g/ml RNase，37℃孵育1h。抽提：加入500μl平衡酚，颠倒混匀、静置5min，8000r/min离心1min。移取上层加入250μl平衡酚和250μl氯仿∶异戊醇(24∶1)颠倒混匀、静置5min，加500μl氯仿，颠倒混匀、静置5min，8000r/min离心1min，取上层水相。沉淀：加入2倍体积无水乙醇，‑20℃放置1h。12000r/min离心10min。溶解：弃上清并置于超净台吹干，加入50μl ddH2O溶解DNA。所述山梨醇缓冲液为：1mol/L，pH 7.5；所述TE缓冲液为：1mol/LTris·Cl，pH 8.0，0.5mol/L EDTA，0.5mol/L柠檬酸，加水至1000ml。