[发明专利]一种从酿酒酵母细胞中高效提取高分子量基因组的方法

权利要求书

1.一种从酿酒酵母细胞中高效提取高分子量基因组的方法，其特征在于：包括破壁、去除组蛋白和RNA、抽提、沉淀、溶解，具体工艺过程如下：

破壁：用500μl的山梨醇缓冲液悬浮酿酒酵母，加入40μl、1000U/ml的lyticase和1μl β-巯基乙醇，混匀后37℃孵育3h。

去除组蛋白和RNA：8000r/min 1min离心弃上清(加速要慢)，加500μlTE缓冲液(pH8.0)，混匀后加50μl、10％SDS，加入10μl、200mg/ml蛋白酶k，再加入10μl、10g/ml RNase，37℃孵育1h。

抽提：加入500μl平衡酚，颠倒混匀、静置5min，8000r/min离心1min。移取上层加入250μl平衡酚和250μl氯仿∶异戊醇(24∶1)颠倒混匀、静置5min，加500μl氯仿，颠倒混匀、静置5min，8000r/min离心1min，取上层水相。

沉淀：加入2倍体积无水乙醇，-20℃放置1h。12000r/min离心10min。

溶解：弃上清并置于超净台吹干，加入50μl ddH₂O溶解DNA。

所述山梨醇缓冲液为：1mol/L，pH 7.5；

所述TE缓冲液为：1mol/LTris·Cl，pH 8.0，0.5mol/L EDTA，0.5mol/L柠檬酸，加水至1000ml。