[发明专利]一种药物组合物注射液的质量检测方法

摘要

本发明公开一种药物组合物注射液的质量检测方法；其中色谱指纹图谱质量检测方法用分析色谱柱：Agilent XDB-C18 150×4.6mm 5μm，检测波长：205nm，柱温：30℃，流速：0.8ml/min；供试品溶液制备，取药物组合物注射液，水浴蒸干，残渣加入冰醋酸水溶液溶解，上固相萃取柱分离，梯度洗脱，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μl分析，供试品指纹图谱(见附图40)；本发明还提供该药物组合物注射液中总皂苷和9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法。

主权项

一种药物组合物注射液的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别和/或指纹图谱检测方法：A、药物组合物注射液中总皂苷成分的含量测定方法为：对照品溶液制备，精密称取人参皂苷Rg1标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.98～1.10mg/ml的人参皂苷储备溶液；精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.0～1.2mg/ml的黄芪甲苷储备溶液，将以上两种储备溶液按照1∶1V/V的比例混合，制成浓度为1.0～1.1mg/ml对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液2～3ml，注入活化后的C18 SPE柱，依次采用水10ml，1％乙酸‑水15ml，水15ml，10％甲醇‑水10ml，80％甲醇‑水15ml，洗脱，将80％甲醇‑水洗脱部分蒸干，取甲醇适量定容于2ml容量瓶，制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60℃进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却1min，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；B、药物组合物注射液中9，10‑二甲氧基紫檀烷‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的含量测定方法为：对照品溶液制备，称取9，10‑二甲氧基紫檀烷‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷对照品，配制为15.0～16.5μg/ml的对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入1％冰醋酸水溶液1～3ml使溶解，上C‑18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15ml 1％冰醋酸水溶液洗脱，再以10ml水洗脱，然后以10％甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80％甲醇18ml溶液洗脱，收集80％甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μL分析；液相条件：Agilent Eclipse XDB‑C18：150×4.6mm，5μm，流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱：0分钟：15％A，30分钟：25％A，40分钟：40％A，检测波长207nm，柱温30℃，流速0.8ml/min；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60℃进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却1min，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；C、药物组合物注射液指纹图谱检测方法为：色谱条件，分析色谱柱Agilent XDB‑C18：150×4.6mm，5μm，检测波长205nm，柱温30℃，流速0.8ml/min，理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000，流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱： 0分钟：15％A，20分钟：19％A，36分钟：25.5％A，50分钟：50％A，65分钟：70％A，85分钟：70％A；质谱条件：电喷雾(ESI)离子源，正离子模式；气帘气温度(Gas temp)350℃；气帘气流速(Gas flow)8L/min；辅助气压力(Nebulizer)为30psi；毛细管电压(Vcap)：4000V；四级杆‑飞行时间串联质谱仪条件(MS QTOF conditions)：碎裂电压(Fragmentor)：175V；截取锥电压(Skimmer)：65V；第一重八级杆的射频电压(OCT1 RF Vpp)750V；供试品溶液制备：精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入1％冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C‑18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15ml 1％冰醋酸水溶液洗脱，再以10ml水洗脱，然后以8％～12％甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以75％～85％甲醇18ml溶液洗脱，收集75％～85％甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μl分析；对10％和100％甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰；药物组合物注射液指纹图谱共有15个指纹峰，共有指纹峰的相对保留时间分别为：0.712±0.071，0.740±0.074，0.749±0.075，0.769±0.077，0.834±0.083，1.000±0.000，1.019±0.102，1.031±0.103，1.038±0.104，1.045±0.105，1.059±0.106，1.072±0.107，1.173±0.117，1.191±0.119，1.204±0.120；相对保留峰面积分别为：1.616±0.161，2.631±0.263，2.036±0.204，12.671±1.267，3.346±0.335，1.000±0.000，0.868±0.087，0.428±0.043，0.566±0.057，0.854±0.085，0.633±0.063，0.402±0.040，0.417±0.042，0.295±0.030，0.461±0.046；药物组合物注射液由如下方法制成：黄芪25‑35重量份、人参8‑12重量份、苦参素0.5‑1.5重量份以上三味药，人参用60‑80％的乙醇，回流提取1‑3次，每次1‑2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为65℃1.10～1.20的清膏，备用；黄芪加水煎煮1‑3次，每次1‑3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为65℃1.10～1.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使含醇量达75％，用氢氧化钠调PH值至6～7，静置10‑18小时，取上清液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为65℃1.10～1.15的清膏；再加乙醇使含醇量达85％，用氢氧化钠调值PH至6～7，静置，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水到400ml，用氢氧化钠调PH值至6～7，100℃灭菌30分钟，冷藏，抽滤；用氢氧化钠调PH值至6～7，加活性炭适量，搅匀，煮沸15分钟，滤过，滤液备用；另取苦参素溶解，用稀盐酸调PH值至6～7，100‑‑120℃灭菌30分钟，冷藏，抽滤，与脱炭后的药液合并，混匀，加注射用水至规定量，滤过，灌装，即得。