[发明专利]一种同时提取马尾松针叶总RNA和基因组DNA的方法

摘要

以马尾松针叶为材料建立了同时提取总RNA和基因组DNA的方法。采用CTAB-LiCl沉淀方法提取总RNA，LiCl4℃过夜，沉淀用于提取总RNA，上清液用于提取基因组DNA。总RNA纯度好，A260/A280比值在1.8-2.2之间，总RNA产率高，在150-240μgRNA/g鲜重之间；基因组DNA质量好，A260/A280比值在1.8-2.0之间。总RNA可用于cDNA合成、RT-PCR扩增，基因组DNA可用于SSR扩增等研究。

主权项

同时提取马尾松针叶总RNA和基因组DNA的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）总RNA提取：液氮研磨马尾松针叶，之后转移到预热的5ml CTAB缓冲液中，该CTAB缓冲液含有2%CTAB、2%PVP、100mM Tris‑HCl(pH8.0)、25mM EDTA、2M NaCl、0.5g/L亚精胺，使用前加入2%β‑巯基乙醇，水浴加热，用的氯仿/异戊醇抽提两次，LiCl沉淀，上清液转移到新管，记为溶液1备用；沉淀用500μl SDS缓冲液溶解，500μl氯仿/异戊醇抽提一次，乙醇沉淀，干燥后加水溶解，得总RNA；所述SDS缓冲液含有1.0M NaCl、0.5% SDS、10mM Tris‑HCl (pH8.0)、1mM EDTA(pH8.0)；所述氯仿与异戊醇的体积比为24：1；（2）基因组DNA提取：用5ml异丙醇沉淀第（1）步中的溶液1，之后加入500μl SDS缓冲液溶解沉淀，500μl氯仿/异戊醇抽提一次，乙醇沉淀，最后用70%酒精洗涤2次，干燥后加水溶解，得基因组DNA。