[发明专利]一种产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法

摘要

本发明属于生物工程领域，涉及一种产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法。本发明通过对根霉菌高产菌株和原始菌株代谢组的测量和比较解析，从而全面获得根霉菌高产富马酸胞内代谢特征信息，为发酵过程控制优化提供重要指导。与其它发酵调控策略相比，该方法能对细胞内所有代谢物进行无偏分析，深入理解根霉菌高产富马酸的机制，对发酵调控更具有针对性，效率更高，可以为发酵过程控制优化提供一种高效、系统的方法。

主权项

一种产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法，其特征在于包括以下步骤：（1）同步培养将根霉菌的原始菌株和其高产突变株在同样的培养条件下进行同步培养发酵富马酸，并每12～16 h对发酵液进行取样；（2）根霉菌胞内代谢物的提取将取样得到的发酵液中的根霉菌细胞用冷甲醇溶液灭活，并将淬灭后的根霉菌细胞在液氮中捣碎；将甲醇、氯仿、水的预冷溶液加入到细胞粉末中，同时，加入核糖醇作为内标物，振荡混均；（3）GC TOF MS测定和胞内代谢物分析将步骤（2）得到的样品分别加入甲氧基铵盐酸盐的吡啶溶液和三甲基硅烷基三氟乙酰后，用GC TOF MS分析，定性定量检测出根霉菌细胞内所有代谢物；（4）多元统计分析利用主成分分析法对步骤（3）确定的胞内代谢物进行分析，确定生物标记物和显著变化因素；（5）高产富马酸根霉菌突变株的机理分析将步骤（4）分析得到的生物标记物和显著变化因素结合根霉菌的代谢功能区进行比对，分析高产富马酸突变株细胞内的代谢特征，从代谢水平理解突变株高产富马酸的机理；（6）根霉菌生物合成富马酸的发酵调控结合根霉菌高产突变菌株的胞内代谢特征，改变发酵过程参数，以实现调控根霉菌生物合成富马酸的发酵过程。