[发明专利]制备5’-磷酸二酯酶的方法及用其制备2’-脱氧核苷酸的方法有效
| 申请号： | 201010169002.5 | 申请日： | 2010-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN101845422A | 公开（公告）日： | 2010-09-29 |
| 发明（设计）人： | 丁庆豹;欧伶;魏晓琨;许彦梅;王玥 | 申请（专利权）人： | 上海斯贝生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/16 | 分类号： | C12N9/16;C12P19/30 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200235 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明制备5’-磷酸二酯酶的方法及用其制备2’-脱氧核苷酸的方法，提供了一种高活力高纯度液体5’-磷酸二酯酶的制备方法，并应用该制备的5’-磷酸二酯酶酶法降解脱氧核糖核酸生产2’-脱氧核苷酸。麦芽根粉碎至300目，加入7倍重量的去离子在45℃浸泡4h，纱布过滤，加入0.5倍体积的丙酮，离心去除沉淀，再加入4倍体积的丙酮，分离出5’-磷酸二酯酶，酶活可高达5000U/mL以上。用该酶降解脱氧核糖核酸，2’-脱氧核苷酸的转化率可达80％以上。经分离纯化，制备得到的2’-脱氧核苷的纯度与含量均达到98％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 磷酸二酯酶 方法 脱氧 核苷酸 | ||
【主权项】：
从麦芽根中制备5’-磷酸二酯酶的方法，其特征在于包括如下步骤，(1)浸泡：将粉碎或未粉碎的麦芽根与去离子水混合、浸泡，浸泡温度10-50℃、浸泡时间1-8小时；(2)固液分离：浸泡结束后，过滤或离心，收集清液；(3)清液中加入0.1-0.5倍的有机溶剂，并搅拌1-8小时，于1000-10000转/min离心去除残渣，收集离心液；(4)向离心液中加入0.5-20倍离心液体积的有机溶剂，于室温下静置1-24h后，虹吸去除上层的液体，下层的液体搅匀即为高纯度液体5’-磷酸二酯酶。
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