[发明专利]一种制备App菌影的方法及App菌影装载巴氏杆菌抗原制备亚单位疫苗的方法

摘要

本发明公开了一种制备App菌影的方法及App菌影装载巴氏杆菌抗原制备亚单位疫苗的方法，采用可控双裂解技术制备重组猪胸膜肺炎放线杆菌APP菌影，将巴氏杆菌保护基因导入APP菌影载体，制成猪胸膜肺炎和巴氏杆菌二联基因疫苗。用以预防猪巴氏杆菌病和胸膜肺炎。实现菌影载体的制备及其在重要动物传染病预防中的应用，同时为多联基因疫苗的研究提供方法。动物实验显示该二联疫苗对猪传染性胸膜肺炎和巴氏杆菌病保护率达分别为99％和99.2％。

主权项

一种利用E.coli‑App穿梭载体pMC‑Express和双基因裂解制备App菌影的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)通过PCR扩增噬菌体PhiX174裂解基因E和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因SN编码序列，通过柔性氨基酸linker串联上述双基因得到E‑15aalinker‑SN，将E‑15aa linker‑SN与含有λpL/pR‑cI857温控启动子的表达载体pBV220构建温控重组表达载体pBV‑E‑15aa linker‑SN；2)利用引物扩增温控双基因裂解盒插入到E.coli‑App穿梭载体pMC‑Express中，构建重组穿梭表达载体EAlysis‑vector；3)采用电转化法将重组穿梭表达质粒导入App菌体，通过升温诱导制备App菌影，菌影冻干保存。