[发明专利]一种邻苯二甲酸二异辛酯的酶联免疫检测方法

摘要

一种邻苯二甲酸二异辛酯的酶联免疫检测方法，属于免疫检测技术领域。本发明利用合成的邻苯二甲酸二异辛酯免疫原免疫得到多克隆抗体，以邻苯二甲酸二异辛酯为标准品，以邻苯二甲酸二异辛酯半抗原与OVA的偶联物作为包被抗原，建立了邻苯二甲酸二异辛酯的间接竞争酶联免疫分析方法。本发明建立了邻苯二甲酸二异辛酯的间接ELISA方法，为邻苯二甲酸二异辛酯的残留检测提供了一种快速高效的检测方法，由于采用的是多克隆抗体，费用较低且稳定性和重复性好。灵敏度为0.085ng/mL，线性范围为0.1～25ng/mL。免疫反应的高特异性和亲和性使ELISA具有极高的选择性和灵敏度。

主权项

1、一种邻苯二甲酸二异辛酯的酶联免疫检测方法，其特征在于利用合成的邻苯二甲酸二异辛酯免疫原免疫得到多克隆抗体，以邻苯二甲酸二异辛酯为标准品，以邻苯二甲酸二异辛酯半抗原与OVA的偶联物作为包被抗原，建立动物性食品中的邻苯二甲酸二异辛酯的间接竞争酶联免疫方法；步骤如下：(1)以0. 05M的碳酸盐缓冲溶液将包被抗原以1∶5000～1∶8000进行稀释，加入酶标板中，每孔加100μL，4℃孵育过夜，然后用含0.1％明胶的上述碳酸盐缓冲液200μL/孔作为封闭液，封闭2h；(2)将0. 01，0.1，0.5，1，5，10，20ng/mL系列浓度梯度的邻苯二甲酸二异辛酯标准品或处理好的样品到各自的酶标孔中，每孔加50μL；同时加入以抗体稀释液稀释1∶6000～1∶9000的抗血清，每孔加50μL，37℃竞争1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(3)以抗体稀释液将辣根过氧化物酶标记的羊抗兔GAR-HRP以1∶3000～1∶5000进行稀释，每孔加100μL，37℃作用1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(4)配置显色液A液：0. 933g柠檬酸，3.68g Na2HPO4·12H2O，18μL30％H2O2用超纯水定容至100mL；B液：60mg3，3/，5，5/-四甲基联苯胺溶于100mL乙二醇中；使用前将A液与B液以5∶1体积比混合；(5)每孔加入显色液100μL，37℃显色15min；最后加入终止液2M硫酸溶液，每孔100μL；酶标仪450nm测吸光值A450，与所作标准曲线对比算出待测样品的邻苯二甲酸二异辛酯浓度。