本发明提供了一种促进环状RNA成环的序列组合及其应用,所述促进环状RNA成环的序列组合包括SEQ ID No.1~2所示的核苷酸序列组合或SEQ IDNo.3~4所示的核苷酸序列组合。本发明还提供了一种促进环状RNA成环的载体及其制备方法以及一种促进环状RNA成环并过表达的方法。本发明所述促进环状RNA成环的序列组合可以提高环状RNA的成环效率,连接入骨架载体中,制成促进环状RNA成环的载体,配合促进环状RNA成环并过表达的方法,实现了环状RNA在体外的高成环率、高表达量表达,操作简单,技术成熟,应用价值极高。