本发明提供一种猪圆环病毒2型抗原纯化浓缩方法,涉及生物医学技术领域。一种猪圆环病毒2型抗原纯化浓缩方法,包括以下步骤:(1)将氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的接头蛋白加入猪圆环病毒2型抗原中,混匀,孵育;(2)加入纯化载体,混匀,孵育;所述纯化载体为乳酸乳球菌骨架;(3)离心,取沉淀。本发明纯化浓缩方法,能够除去大量杂蛋白,抗原回收效率高、浓缩倍数高,对设备要求低,操作简单,成本低。
本发明提供一种检测母猪初乳中sIgA的试剂盒,属于生物技术领域。检测母猪初乳中sIgA的试剂盒,包括猪sIgA‑Fc蛋白纳米抗体51溶液和辣根过氧化物酶标记的猪sIgA‑Fc蛋白纳米抗体72溶液;所述猪sIgA‑Fc蛋白纳米抗体51的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述猪sIgA‑Fc蛋白纳米抗体72的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明检测母猪初乳中sIgA水平的试剂盒,制备方法简单、制作成本低、特异性强、灵敏度高、稳定性好。
本发明提供一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法,涉及生物技术领域。一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法,包括以下步骤:(1)将氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的接头蛋白加入口蹄疫病毒灭活抗原中,混匀,孵育;(2)加入纯化载体,混匀,孵育;所述纯化载体为乳酸乳球菌骨架;(3)离心,取沉淀。本发明纯化浓缩方法能够高效纯化口蹄疫病毒灭活抗原、高效除去杂质,抗原回收效率高、浓缩倍数高,对设备要求低,操作简单,成本低。
本发明提供一种检测O型口蹄疫病毒的试剂盒,属于生物技术领域。检测O型口蹄疫病毒的试剂盒,包括O型口蹄疫病毒纳米抗体6和辣根过氧化酶标记的O型口蹄疫病毒纳米抗体24;所述O型口蹄疫病毒纳米抗体6的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述O型口蹄疫病毒纳米抗体24的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明试剂盒制备方法简单、成本低,特异性较强、灵敏度较高、稳定性好。
本发明提供密码子优化的猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因及其应用,属于分子生物学领域。所述Cap蛋白编码基因如SEQ ID NO:1。含有所述基因的重组载体、重组菌。制备猪圆环病毒2型病毒样颗粒的方法,诱导重组菌表达猪圆环病毒2型Cap蛋白,将重组菌裂解,取裂解液,纯化后获得猪圆环病毒2型病毒样颗粒。以所述病毒样颗粒为活性成分的基因工程亚单位疫苗。密码子优化的猪圆环病毒2型Cap能够实现大量可溶性表达。病毒样颗粒(VLP)由Cap蛋白组装而成,具有良好的免疫原性。采用本发明病毒样颗粒制备的疫苗,可预防猪圆环病毒2型感染,具有免疫原性好、抗体水平较高、攻毒后能够起到有效保护的优点。
本发明提供编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因及其应用,属于分子生物学领域。编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因,含有SEQ ID NO:1所示的序列。本发明还提供含有上述基因的重组表达载体,含有重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的复合物。该复合物制备方法为:培养重组菌,破碎获得裂解液上清,纯化后获得含有重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的复合物。本发明将Cap蛋白编码基因进行了密码子优化,所以重组Cap蛋白能够高产、高效、可溶表达;由于上述复合物含有肽聚糖锚钩蛋白PA,有利于后续纯化。本发明重组猪圆环病毒2型Cap蛋白活性良好,含有该重组蛋白的复合物免疫小鼠后可产生高水平的猪圆环病毒2型特异性抗体。