本发明提供了一种靶向革兰氏阴性菌的抗菌肽及其制备方法和应用。抗菌肽F1‑2,其序列如SEQ ID No.1所示。本发明以人髓化分样蛋白MD‑2的119‑132片段为基础片段,利用精氨酸定点突变技术,构建出靶向革兰氏阴性菌的抗菌肽F1‑2。本发明的抗菌肽F1‑2,对革兰氏阴性菌的抗菌能力极强,并且可以在较低的浓度完全清除革兰氏阴性菌。在混合微生物群落中,抗菌肽F1‑2对革兰氏阴性菌具有极强的选择性,可以特异性地杀灭革兰氏阴性菌,对革兰氏阳性菌影响较小,并且,本发明的F1‑2生物相容性良好。本发明还公开了抗菌肽F1‑2在制备治疗革兰氏阴性菌引发的感染性疾病药物中的应用。