本发明提供一种区别禽坦布苏病毒弱毒疫苗株和野毒株的PCR‑RFLP方法,本发明的方法仅需上游引物F和下游引物R(SEQ ID NO.1‑2所示),并仅需常规限制性内切酶Hind III进行RFLP酶切后进行鉴别,无需复杂繁琐的条件优化过程,本发明在禽坦布苏病毒野毒株和鸭坦布苏病毒弱毒疫苗株快速鉴别诊断检测上快捷准确,解决目前尚未能解决的区别商品化弱毒疫苗毒与野毒株的难题,可以对我国广泛使用疫苗株WF100的养殖场进行禽坦布苏病毒检测与疾病的诊断以及实验研究中这些病毒株的相互鉴别。
本发明提供了一种用于禽源多杀性巴氏杆菌及其血清型鉴定的多重PCR引物,所述引物序列如SEQ ID NO.1‑6所示。本发明根据NCBI(National Center for Biotechnology Information)数据库禽源多杀性巴氏杆菌中kmt1基因(Genbank:AF16259)、编码荚膜A型(capA)(Genbank:AF067175)和编码脂多糖(LPS1)基因簇等的保守序列进行引物设计,于国内外率先建立禽源多杀性巴氏杆菌及其血清型(A型和L1型)鉴定的多重PCR引物,该方法灵敏度高、特异性强,最低可检测116pg的核酸。
本发明属于动物传染病学检测领域,本发明公开了鸭巴泰病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该方法根据鸭巴泰病毒基因组保守序列设计引物:外引物F3和B3;内引物FIP和BIP;环引物LB,具体序列分别见SEQ ID NO.1‑5。根据所设计的引物建立一种检测鸭巴泰病毒的环介导等温扩增方法。该检测方法与鸭常见传染病病原不发生交叉反应。本发明的检测方法特异性强、准确性好、灵敏度高,无需昂贵仪器设备,便于基层临床现场使用,方便快速。
本发明涉及一种鸭4型腺病毒(duck adenovirus 4,DAdV‑4)实时荧光定量PCR检测引物和探针,具体序列分别见SEQ ID NO.1‑3。本发明包括特异性引物和探针序列的设计、标准质粒的构建、实时荧光定量PCR扩增方法的建立和优化、结果检测判定。本发明建立的检测DAdV‑4的实时荧光定量PCR的方法,在检测DAdV‑4上灵敏度高、稳定性好、特异性强、重复性好,最低可检测33.52个拷贝/μL,可用于检测临床样本中DAdV‑4的致病机理研究和开展疫病流行病学调查。
本发明提供用于检测新发鸭4型腺病毒(duck adenovirus 4,DAdV‑4)的实时荧光定量PCR引物及试剂盒,引物序列如SEQ ID NO.1‑2所示,具有很高的特异性和灵敏度。本发明建立的方法能够对鸭群中新发鸭4型腺病毒感染进行检测和定量,简化操作程序、节约成本。实时荧光定量PCR反应结束后,通过观察其扩增曲线结合熔解曲线峰值(Tm值)即可直接对结果进行判断,本发明的建立可填补国内外相关领域空白。
本发明涉及一种鸭丙型肝炎病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该方法根据鸭丙型肝炎病毒基因组保守序列设计引物组:外引物(DUHCV‑F3和DUHCV‑B3)、内引物(DUHCV‑FIP和DUHCV‑BIP)和环引物(DUHCV‑LF和DUHCV‑LB),具体序列分别见SEQ ID NO.1‑6。根据所设计的引物组建立一种鸭丙型肝炎病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该试剂盒检测方法与鸭常见传染病病原不发生交叉反应。本发明的检测方法特异性强、准确性好、灵敏度高,无需昂贵仪器设备,便于基层临床现场使用,方便快速。
本发明涉及一种鸭3型腺病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。本发明根据鸭3型腺病毒基因组保守序列设计引物组:外引物(YX3‑F3和YX3‑B3)、内引物(YX3‑FIP和YX3‑BIP)和环引物(YX3‑LF和YX3‑LB),具体序列分别见SEQ ID NO.1‑6。根据所设计的引物组建立一种鸭3型腺病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该试剂盒检测方法与鸭常见传染病病原不发生交叉反应。本发明的检测方法特异性强、准确性好、灵敏度高,无需昂贵仪器设备,便于基层临床现场使用,方便快速。
本发明涉及一种鸭新型微核糖核酸病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该方法根据鸭新型微核糖核酸病毒基因组保守序列设计引物组:外引物(DUMV‑F3和DUMV‑B3)、内引物(DUMV‑FIP和DUMV‑BIP)和环引物(DUMV‑LB)。具体序列分别见SEQ ID NO.1‑5。根据所设计的引物组建立一种鸭新型微核糖核酸病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该试剂盒检测方法与鸭常见传染病病原不发生交叉反应。本发明的检测方法特异性强、准确性好、灵敏度高,无需昂贵仪器设备,便于基层临床现场使用,方便快速。
本发明涉及一种鸭4型腺病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒,本发明根据鸭4型腺病毒基因组保守序列设计引物组:外引物(X4‑F3和X4‑B3)、内引物(X4‑FIP和X4‑BIP)和环引物(X4‑LF和X4‑LB),具体序列分别见SEQ ID NO.1‑6。根据所设计的引物组建立一种鸭4型腺病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该试剂盒检测方法与鸭常见传染病病原不发生交叉反应。本发明的检测方法特异性强、准确性好、灵敏度高,无需昂贵仪器设备,便于基层临床现场使用,方便快速。