本发明涉及生物工程领域,尤其涉及突变体组合物、融合酶及胶原三肽的制备方法。本发明提供了突变体组合物,包括突变体1和突变体2;所述突变体1具有:如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列和所述突变体2具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。本发明提供的制备方法,利用廉价的氨基酸作为原料,在三磷酸腺苷(ATP)以及对应的连接酶作用下高收率的转化成相应的二肽或三肽产物。在反应体系中引入ATP循环再生系统可以大大降低其使用量;同时通过构建融合酶减少实际生产过程中酶的用量;利用固定化酶催化进一步优化反应及纯化工艺,制备方案非常精简、收率高、产品品质好,易规模化。