本发明公开了一种适于表达mRNA的质粒载体及其制备方法与应用,属于生物新药领域,本发明提供的适于表达mRNA的质粒载体以pUC18为骨架质粒,其序列与SEQ ID No.1具有至少85%的序列相似性,包含成药序列和多克隆位点,成药序列包括:5‑帽结构、5’‑UTR、开放阅读框架、3’‑聚腺苷酸序列和3’‑UTR。本发明提供的适于表达mRNA的质粒载体相比于传统表达mRNA的质粒具有多个酶切位点,具有更广的适用性。同时,使用本发明提供的适于表达mRNA的质粒载体表达表达的mRNA的效率高、稳定性强。对mRNA药物的生产具有重要意义。