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[发明专利]一种磁靶向、装载肝细胞响应型mRNA的工程化细胞外囊泡及其构建方法和应用-CN202310876496.8在审
发明人：袁丽君;张亮;王辰;卜特;李者龙;孙汶齐;刘佳涵;王兰天;张彬 -专利权人：中国人民解放军空军军医大学
申请日： 2023-07-17 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： A61K9/50 文献下载
摘要：本发明提供了一种磁靶向、装载肝细胞响应型mRNA的工程化细胞外囊泡及其构建方法和应用，属于生物医药技术领域。一种工程化细胞外囊泡，包括基因工程改造的细胞外囊泡，细胞外囊泡表面偶联有转铁蛋白修饰的超顺磁性氧化铁纳米粒子和加载有促凋亡蛋白BAX的激动剂；细胞外囊泡膜上表达PTGFRN(Δ687)‑MCP融合蛋白，MCPRNA结合蛋白提高细胞外囊泡对含有miR‑122识别位点的iBaxmRNA的装载量；促凋亡蛋白BAX的激动剂嵌入细胞外囊泡的磷脂双分子层。本发明的工程化细胞外囊泡制备方法简单，有主动脉斑块磁靶向性、高效核酸药物装载、副作用低等优点，为动脉粥样硬化及其它年龄相关疾病的治疗提供参考。
一种靶向装载肝细胞响应 mrna 工程细胞外囊泡及其构建方法应用

[发明专利]一种超声辅助免疫激活的肿瘤疫苗及其制备方法和应用-CN202310769607.5在审
发明人：袁丽君;孙汶齐;杨国栋;纪盼盼;李者龙;邢长洋;张亮;韦梦影 -专利权人：中国人民解放军空军军医大学
申请日： 2023-06-28 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： A61K39/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种超声辅助免疫激活的肿瘤疫苗及其制备方法和应用，属于肿瘤生物免疫治疗领域。本发明提供的肿瘤疫苗以聚乳酸‑羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体，共装载肿瘤细胞膜蛋白、肿瘤细胞总RNA和声敏剂chlorine6得到，所述肿瘤细胞总RNA使用多聚赖氨酸(Poly‑L‑Lysine，PLL)进行聚合保护。本发明促进了肿瘤疫苗在溶酶体的逃逸，提高了MHCI类抗原提呈水平，所述疫苗还可通过产生ROS促进树突状细胞成熟，增强T细胞免疫应答。本发明所述疫苗生物安全性高，纳米粒径级别更容易被细胞吞噬以及进入淋巴结，可用于预防术后多种肿瘤的复发和转移。
一种超声辅助免疫激活肿瘤疫苗及其制备方法应用

[发明专利]一种靶向肝脏拮抗PCSK9并特异性结合LDL-C的工程化外泌体及其构建方法和应用-CN202310332642.0在审
发明人：袁丽君;王辰;杨国栋;韦梦影;李者龙;张亮;孙汶齐 -专利权人：中国人民解放军空军军医大学
申请日： 2023-03-30 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种靶向肝脏拮抗PCSK9并特异性结合LDL‑C的工程化外泌体及其构建方法和应用，属于外泌体技术领域。本发明对跨膜蛋白PTGFRN进行改造，在膜外融合表达包含LDLR的L3‑L7区段PTGFRN序列，进而能够特异结合LDL‑C；同时将PCSK9抑制药物Inclisiran与外泌体表面连接。所述工程化外泌体同时具备拮抗PCSK9和促进LDL‑C降解双重功效，既能高效靶向肝脏并抑制肝细胞表达PCSK9，又能特异性结合LDL‑C至肝脏降解，为降低血脂含量提供崭新途径，具有广泛应用价值。同时，本发明提供的工程化外泌体具有制备方法简便，能够实现大规模生产工程化外泌体，为广泛应用提供了基础。
一种靶向肝脏拮抗 pcsk9 特异性结合 ldl 工程化外及其构建方法应用

[发明专利]红细胞膜在增加外泌体产量中的应用-CN202210789268.2有效
发明人：杨国栋;张荣鑫;孙汶齐;韦梦影;袁丽君;王辰;李者龙;卜特 -专利权人：中国人民解放军空军军医大学
申请日： 2022-07-05 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明属于外泌体制备技术领域，具体涉及红细胞膜在增加外泌体产量中的应用。本发明通过在培养制备外泌体的试剂中增加红细胞膜，利用细胞对红细胞膜的内吞作用和膜成分补充，促进外泌体的生成，可以显著增加外泌体的产量，是采用未添加红细胞膜的常规试剂制备得到的外泌体产量的近7倍，且此外泌体的装载效率、递送效率和治疗效果与采用常规培养基培养得到的外泌体不存在差异。
细胞膜增加外泌体产量中的应用

[发明专利]一种基于具有按需抗炎功能、装载炎症响应型mRNA的工程化外泌体及其构建方法和应用-CN202111402944.8有效
发明人：袁丽君;卜特;祁媛玺;杨国栋;张荣鑫;李者龙;孙汶齐 -专利权人：中国人民解放军空军军医大学
申请日： 2021-11-24 - 公布日： 2022-10-28 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明一种基于具有按需抗炎功能、装载炎症响应型mRNA的工程化外泌体及其构建方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明所述融合基因的结构，包括：IRES、IL‑10和miR‑122配对序列，本发明基于所述融合基因构建了重组载体和重组细胞，并利用重组细胞生产工程化外泌体，所述工程化外泌体具有理想的组织特异性和良好的治疗效果，且所述外泌体制备方法简单，可实现按需抗炎治疗具有组织特异性强、脱靶率低等优点，可作为基因治疗的载体，意义重大。
一种基于具有按需抗炎功能装载炎症响应 mrna 工程化外及其构建方法应用

[发明专利]协同靶向肝脏递送LDLR的重组基因集、载体组、外泌体及构建方法和应用-CN202110514819.X有效
发明人：袁丽君;李者龙;杨国栋;韦梦影;王辰;孙汶齐;刘云楠 -专利权人：中国人民解放军空军军医大学
申请日： 2021-05-10 - 公布日： 2022-03-11 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程领域，特别是涉及协同靶向肝脏递送LDLR的重组基因集、载体组、外泌体及构建方法和应用。本发明提供了协同靶向肝脏递送LDLR的重组基因集，所述重组基因集包括第一重组基因和第二重组基因；所述第一重组基因从5’端至3’端包括依次连接的IRES片段、LDLR片段和MS2片段；所述第二重组基因从5’端至3’端包括依次连接的kozak片段、CD63第一片段、Apoa1片段、CD63第二片段和MCP片段。本发明所述重组基因集肝脏靶向能力显著提高，具有高效装载核酸药物和脱靶率低的优势，同时还能够有效治疗高脂血症和动脉粥样硬化。
协同靶向肝脏递送 ldlr 重组基因载体外泌体构建方法应用

[实用新型]一种便利型兽医用灌药装置-CN202120027781.9有效
发明人：刘云先;孔繁才;乔晓甜;李者龙 -专利权人：刘云先;孔繁才;乔晓甜
申请日： 2021-01-07 - 公布日： 2022-01-11 - 主分类号： A61D7/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种便利型兽医用灌药装置，属于兽医治疗用设备技术领域，一种便利型兽医用灌药装置，包括灌药组件和用于放置灌药组件的支架组件，灌药组件包括连接横板，连接横板的中部固定贯穿有导药管，导药管的顶端固定连接有灌药斗，连接横板的底端固定连接有两对支撑块，每对支撑块之间均固定连接有滑杆，滑杆的外壁上滑动连接有滑块，滑块的底端固定连接有嘴套，连接横板的外壁上固定套设有固定套筒，固定套筒的外壁上套设有调节套筒。可以实现：可将两个嘴套分别套设于动物的上嘴部和下嘴部上，使动物的嘴无法闭合，从而便于兽医给动物进行灌药，且两个嘴套间的距离，可根据动物的嘴巴大小进行调节，实用性强。
一种便利兽医用灌药装置

[实用新型]一种畜牧兽医用疫苗存放箱-CN202120058422.X有效
发明人：周淑容;李者龙 -专利权人：周淑容
申请日： 2021-01-11 - 公布日： 2021-12-31 - 主分类号： B65D25/10 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种畜牧兽医用疫苗存放箱，属于畜牧领域，一种畜牧兽医用疫苗存放箱，包括存放箱，存放箱内壁开凿有一对第一滑槽，第一滑槽的内部滑动连接有第一滑块，一对第一滑块之间固定连接有连接板，连接板的下端固定连接有一对支撑杆，支撑杆的下端固定连接有顶板，存放箱的内底壁固定连接有一对弹性伸缩杆，一对弹性伸缩杆的上端与顶板的下端固定连接，连接板和固定板的上端均开凿有多个均匀分布的通孔，通孔的内部插设有试管，通孔的内壁开凿有一对滚槽，滚槽的内部设有滚轮，它可以实现对疫苗进行更好的密封，减少细菌进入疫苗内部，且有效的减少疫苗在搬运时的晃动，从而更好的保护疫苗不易损害。
一种畜牧兽医疫苗存放

[实用新型]一种便于对接的畜牧养殖用耳标-CN202120037486.1有效
发明人：刘国峰;孙丽;李者龙 -专利权人：刘国峰;孙丽
申请日： 2021-01-08 - 公布日： 2021-11-26 - 主分类号： A01K11/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种便于对接的畜牧养殖用耳标，属于畜牧养殖技术领域，一种便于对接的畜牧养殖用耳标，包括上标板、下标板、标杆，下标板与上标板相匹配，上标板的顶端固定连接有与标杆相匹配的导向筒，上标板和下标板内均开设有与标杆相匹配的穿导孔。可以实现通过连接杆、连接板、固定套筒、夹紧弹簧、活动滑杆的设置，安装耳标时，可在夹紧弹簧弹力的作用下，先将上标板、下标板夹持于牲畜耳朵的两侧，使上标板、下标板相对固定，然后在导向筒、穿导孔的导向作用下，插入标杆并拧上下活动卡块，即可将耳标固定至牲畜的耳朵上，无需费力将上标板、下标板进行对准，大大降低了上标板、下标板的对接难度。
一种便于对接畜牧养殖用耳标

[发明专利]一种类棕色脂肪外泌体及其工程化生产方法和应用-CN201910806850.3有效
发明人：杨国栋;周雪莹;袁丽君;孙汶齐;李者龙;邢长洋;赵联璧;刘云楠;王辰 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2019-08-29 - 公布日： 2021-06-29 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供了一种类棕色脂肪外泌体及其工程化生产方法和应用，属于细胞工程和基因重组技术领域。类棕色脂肪外泌体的工程化生产方法，包括以下步骤：从脂肪组织中分离脂肪干细胞；构建同时表达PGC1a和PRDM16的病毒表达载体；将所述病毒表达载体包装成病毒；用所述病毒感染所述脂肪干细胞；将感染有病毒的脂肪干细胞经培养，收集类棕色脂肪外泌体。通过基因改造的方法，将PGC1a和PRDM16基因导入脂肪干细胞中激活脂肪干细胞中众多棕色化脂肪相关的基因表达，将脂肪干细胞改造为棕色脂肪干细胞，进而产生类棕色脂肪外泌体，所述类棕色脂肪外泌体具有棕色脂肪外泌体的特征，为肥胖等代谢性疾病提供了潜在的治疗手段。
种类棕色脂肪外泌体及其工程化生方法应用

[发明专利]分布式网络资产异步扫描方法及设备-CN201910218209.8有效
发明人： 李者龙;姜强;李敬勋 -专利权人：北京国舜科技股份有限公司
申请日： 2019-03-21 - 公布日： 2021-02-02 - 主分类号： H04L12/26 文献下载
摘要：本发明实施例提供一种分布式网络资产异步扫描方法及设备，所述方法包括：获取资产扫描任务，所述资产扫描任务中包含扫描目标和扫描参数；将资产扫描任务存入Redis队列；实时监控Redis队列，执行Redis队列中的资产扫描任务。本发明实施例在进行IP地址段扫描时，采用分布式的异步扫描方式，改变了现有技术中进行资产扫描时，效率和准确率低下，实现了资产异步扫描速度快且扫描准确率高的要求。
分布式网络资产异步扫描方法设备

[发明专利]一种表面偶联S蛋白的外泌体及其制备方法和应用-CN202010418002.8在审
发明人：袁丽君;杨国栋;李者龙;孙汶齐 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2020-05-18 - 公布日： 2020-09-11 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明提供了一种表面偶联冠状病毒S蛋白的外泌体及其制备方法和应用，属于生物制药技术领域。通过瞬时转染人细胞或重组慢病毒感染得到稳定细胞株实现适配体CP05‑S蛋白重组表达，与人血浆混合孵育，外泌体通过表面CD63膜分子与适配体CP05结合，形成表面偶联S蛋白的外泌体。本发明采用外泌体呈递抗原S蛋白，使制备的疫苗，避免了免疫佐剂的毒性和病毒疫苗感染的风险，是理想的疫苗研制策略，也是病毒入侵途径封闭的理想策略。同时通过外泌体递送S蛋白，可以竞争抑制新冠病毒的S蛋白与受体结合，发挥封闭作用，有效阻断新冠病毒入侵，因此偶联S蛋白的外泌体作为新型冠状病毒感染的抑制剂，可能用于急性期新冠肺炎的治疗。
一种表面蛋白外泌体及其制备方法应用

[发明专利]一种装载ABCA1 mRNA的外泌体及其构建方法和应用-CN201811158949.9有效
发明人：袁丽君;李者龙;柏丹娜;杨薛康;杨国栋;周雪莹;孙汶齐;赵联璧 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2018-09-30 - 公布日： 2020-08-07 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供一种装载ABCA1 mRNA的外泌体构建方法，属于基因药物技术领域，构建ABCA1融合表达载体和CD9融合表达载体，ABCA1融合表达载体中为ABCA1的CDS序列和串联的RNA结合蛋白识别序列，CD9融合表达载体为CD9的CDS序列和对应的RNA结合蛋白编码基因，将ABCA1融合表达载体与CD9融合表达载体共转染肝细胞，培养后收集外泌体，即得装载ABCA1 mRNA的外泌体。所述构建方法可提高ABCA1 mRNA加载外泌体中的效率，克服分子量大的ABCA1 mRNA分子无法有效装载到外泌体的问题，获得大量含有ABCA1 mRNA的外泌体。
一种装载 abca1 mrna 外泌体及其构建方法应用

[发明专利]一种提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒及其提取方法和应用-CN201811101459.5有效
发明人：杨国栋;卢晓昭;柏丹娜;杨薛康;袁丽君;周雪莹;李者龙;孙汶齐;石瑞静 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2018-09-20 - 公布日： 2020-07-17 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明涉及外泌体分离技术领域，提供一种提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒，包括蛋白A磁珠、磁珠清洗液、FABP4抗体、1号清洗液和2号清洗液。其中FABP4抗体能够与待测血清中的脂肪组织来源外泌体结合，蛋白A磁珠能够与外泌体‑FABP4抗体相互作用，形成蛋白A磁珠‑FABP4抗体‑外泌体复合物，1号清洗液能够去除血清中非脂肪外泌体成分，2号清洗液则能够将“蛋白A磁珠‑FABP4抗体‑外泌体”复合物中的外泌体、FABP4抗体以及蛋白A磁珠之间的相互作用解离，实现从血清中特异性分离脂肪组织来源的外泌体。
一种提取脂肪组织来源外泌体试剂盒及其方法应用

[发明专利]一种LDLR-Lamp2b融合基因、表达载体及其应用-CN201811209509.1有效
发明人：袁丽君;李者龙;杨薛康;赵联璧;邢长洋;杨国栋 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2018-10-17 - 公布日： 2020-06-12 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明提供了一种LDLR‑Lamp2b融合基因、表达载体及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明所述LDLR‑Lamp2b融合基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明将LDLR胞外段和Lamp2b的全长以独特的方式融合作为一个完整的基因，该基因经表达载体转染外泌体包装细胞后，可以将LDLR呈现在外泌体表面，所述外泌体可以携带LDL进入肝脏等组织的细胞，促进LDL的清除，发挥类似于甚至优于PCSK9抑制剂的效果，可用于动脉粥样硬化的防治。
一种 ldlr lamp2b 融合基因表达载体及其应用

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