本发明公开了一种基因工程细胞，为4‑1BBL‑mbIL‑21‑hIgG1‑K562细胞，其细胞膜表面能稳定表达4‑1BB配体4‑1BBL且含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的融合蛋白mbIL‑21‑hIgG1片段。通过本发明所述的基因工程细胞可体外扩增获得具有ADCC高反应性NK细胞，而且所获得的具有ADCC高反应性NK细胞具有CD16更高表达水平，尤其是，所获得的具有ADCC高反应性NK细胞与肿瘤细胞和/或IgG1类抗体接触后，仅使CD16轻微下降，产生了出乎意料的技术效果，所获得的具有ADCC高反应性NK细胞具有明显的肿瘤细胞杀伤效应。
本发明公开了一种高效敲除NK细胞中TIGIT基因的方法，所述方法是利用CRISPR/Cas9基因编辑系统，以电穿孔转染方式将sgRNA与Cas9蛋白的复合物导入经扩增的NK细胞中，其中：sgRNA的序列选自SEQ ID NO.1～4所示序列中的任意一种。采用本发明所述方法可实现对NK细胞中TIGIT基因的敲除效率接近80％，不仅敲除效率高，而且所获得的不表达TIGIT的NK细胞可解除CD155+肿瘤细胞对NK细胞的免疫抑制作用，相对于野生型NK细胞，在体内、体外实验中均展现出更强的抗肿瘤活性，明显提高了NK细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤活性，可望开发成安全有效的抗肿瘤生物制剂。
本发明公开了一种高效敲除NK细胞中CD96基因的方法，所述方法是利用CRISPR/Cas9基因编辑系统，以电穿孔转染方式将sgRNA与Cas9蛋白的复合物导入经扩增的NK细胞中，其中：sgRNA的序列选自SEQ ID NO.1～10所示序列中的任意一种。采用本发明所述方法可实现对NK细胞中CD96基因的敲除，不仅敲除效率较高，而且所获得的不表达CD96的NK细胞可解除CD155+肿瘤细胞对NK细胞的免疫抑制作用，相对于野生型NK细胞，在体内、体外实验中均展现出更强的抗肿瘤活性，明显提高了NK细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤活性，可望开发成安全有效的抗肿瘤生物制剂。
