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[发明专利]含有武夷菌素的复配制剂及其在防治葡萄灰霉病中的应用-CN202211352820.8有效
发明人：葛蓓孛;李博雅;张克诚;施李鸣;吕朝阳 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2022-11-01 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： A01N43/54 文献下载
摘要：本发明公开了含有武夷菌素的复配制剂及其在防治葡萄灰霉病中的应用。本发明提供了复配制剂在如下任一中的应用：（a1）防治灰霉病；（a2）抑制灰霉病菌；所述复配制剂由武夷菌素溶液和嘧霉胺溶液按照体积配比为（7‑27）:3的比例混合而成；所述武夷菌素溶液的浓度为武夷菌素单剂对灰霉病菌的有效中浓度；所述嘧霉胺溶液的浓度为嘧霉胺单剂对灰霉病菌的有效中浓度；所述灰霉病菌为灰霉病菌B05.10；所述灰霉病为由灰霉病菌B05.10引起的灰霉病。本发明为防治葡萄灰霉病提供一种新型生物杀菌剂与化学杀菌剂的复配药剂，为葡萄灰霉病的高效、绿色的防控提供技术指导。
含有菌素配制及其防治葡萄灰中的应用

[发明专利]武夷菌素和ε-聚赖氨酸的复配组合物及杀菌方法和应用-CN202210465456.X在审
发明人：葛蓓孛;张克诚;吕朝阳;施李鸣 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2022-04-29 - 公布日： 2022-08-26 - 主分类号： A01N43/54 文献下载
摘要：本发明提供一种武夷菌素和ε‑聚赖氨酸的复配组合物，包括武夷菌素和ε‑聚赖氨酸。本发明的有益效果是：ε‑聚赖氨酸与武夷菌素复配处理中植株体内CAT、POD、SOD、PAL的活性较高，且酶反应变化幅度更显著，酶活性增幅更大，使番茄植株在受到灰霉病菌的侵染时表现出更强的防御能力。武夷菌素与ε‑聚赖氨酸同时使用时防效明显增强，其在对菌丝生长的抑制和孢子萌发的抑制方面均得到增强，同时，植物的叶片色泽鲜艳，无明显药害产生。一方面加入ε‑聚赖氨酸减轻了武夷菌素成本高的问题，另一方面加入武夷菌素后可减轻高浓度的ε‑聚赖氨酸产生的药害。
菌素赖氨酸组合杀菌方法应用

[发明专利]茴香霉素的制备方法、茴香霉素的检测方法及抑菌应用-CN202011567131.X有效
发明人：葛蓓孛;张克诚;施李鸣;韦秋合;张维;杨淼泠 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2022-05-31 - 主分类号： C12P17/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种茴香霉素的制备方法、茴香霉素的检测方法及抑菌应用，该茴香霉素的制备方法，包括：取小白链霉菌CK‑15的菌株种子液接种于种子培养基，28℃、220rpm培养24h后，按照5％接种量转接至100ml发酵培养基中，30℃发酵5d，将得到的发酵液经离心处理，收集第一上清液；将第一上清液的pH调至9.0，用与上清液等体积的乙酸乙酯萃取第一有机相；用与第一有机相等体积的pH为2.0的酸水对第一有机相反向萃取，收集水相并将水相的pH调至9.0；用与水相等体积的乙酸乙酯萃取，收集第二有机相并旋干。本发明的茴香霉素的制备方法，通过小白链霉菌CK‑15菌株进行发酵制备茴香霉素，相比于采用化学合成方法制备茴香霉素，该制备方法简单，方便操作，成本较低。
茴香霉素制备方法检测应用

[发明专利]一株武夷菌素高产菌株、发酵方法及应用-CN202110123977.2有效
发明人： 施李鸣;葛蓓孛;张克诚;韦秋合;杨淼泠;张维 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2021-01-29 - 公布日： 2022-05-03 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一株武夷菌素高产菌株、发酵方法及应用。菌株的保藏号为CGMCC No.19060。该菌株的发酵方法，包括以下步骤：将菌株接种到培养基，发酵培养。该菌株可以用于制备武夷菌素，并且菌株的发酵液对多种致病菌具有很好的抑菌作用。本发明所述菌株具有生长快、产孢多、武夷菌素产量高、效价高且稳定等优点。
一株武夷菌素高产菌株发酵方法应用

[发明专利]一株玫瑰黄链霉菌及其应用-CN201710044242.4有效
发明人：张克诚;施李鸣;葛蓓孛;刘炳花;赵文珺;徐军 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2017-01-19 - 公布日： 2020-06-05 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供一株玫瑰黄链霉菌及其应用，该菌株为玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)，该菌株的保藏号为CGMCC No.13416，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明所述的玫瑰黄链霉菌及含有玫瑰黄链霉菌和/或其发酵液的菌剂，对植物具有明显的促生作用，同时能够抑制多种病原真菌，具有很好的促生及防治效果，因此具有良好的应用前景。
玫瑰霉菌及其应用

[发明专利]一种从发酵液中分离武夷菌素的方法-CN201810340566.7有效
发明人： 施李鸣;葛蓓孛;张克诚;刘炳花;赵文珺;麻金金;韦秋合 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2018-04-16 - 公布日： 2020-05-05 - 主分类号： C07H19/067 文献下载
摘要：本发明涉及一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，包括以下步骤：1)将含有武夷菌素的发酵液去除其中的培养基固体残渣及菌体，得到上清液；2)利用草酸沉淀步骤1)得到的上清液中的杂质，之后离心，去除沉淀和杂质，得到溶液；3)将步骤2)得到的溶液采用大孔吸附树脂处理，收集流出液；4)将步骤3)收集的流出液通过凝胶层析处理，分别收集不同时间段流出的流出液；5)利用高效液相色谱法检测步骤4)收集的流出液，选择具有武夷菌素且无杂峰的流出液冻干，获得武夷菌素的粗品；6)用制备液相系统或半制备液相系统对5)冻干后的粗品进行制备、精制，获得高纯度武夷菌素。本发明具有提取率高、武夷菌素提取纯度高等优点。
一种发酵分离菌素方法

[发明专利]粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259及其对番茄促生方法-CN201910427489.3在审
发明人：张克诚;葛蓓孛;姜明国;施李鸣;刘炳花 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2019-05-22 - 公布日： 2019-08-16 - 主分类号： A01N25/12 文献下载
摘要：本发明提供一种粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ‑259，包括玫瑰黄链霉菌NKZ‑259的孢子粉、高岭土、分散剂和淀粉，所述玫瑰黄链霉菌NKZ‑259中孢子浓度为5.3×10⁵‑5.5×10⁵cfu/ml，所述粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ‑259的悬浮率大于73%，润湿时间为80s秒。本发明的有益效果是：粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ‑259有利于加速玫瑰黄链霉菌NKZ‑259在生物防治中的推广应用进程，具有重要理论和实践意义。
玫瑰黄链霉菌粉剂生物防治高岭土润湿重要理论分散剂悬浮率孢子粉孢子促生淀粉番茄进程

[发明专利]一种复合微生物可湿性粉剂农药及其制备方法与用途-CN201710067939.3有效
发明人： 施李鸣;李嵘;李峥;王金子 -专利权人：北京国拓生物科技有限公司
申请日： 2017-02-07 - 公布日： 2019-06-18 - 主分类号： A01N63/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种复合微生物可湿性粉剂农药，由以下质量百分比的组分制成：金黄垂直链霉菌发酵物10％～15％、玫瑰黄链霉菌菌丝10％～15％、放线菌球孢链霉菌原粉10％～15％、武夷菌孢子粉10％～15％、芽孢杆菌菌丝10％～15％、氯化胆碱0.5％～2％、轻稀土0.5％～2％、维生素类0.5％～2％、微量元素0.5％～2％、润湿剂2％～5％、分散剂2％～5％、稳定剂2％～5％、填料补足到100％。本发明的复合微生物可湿性粉剂农药成份搭配科学，配伍合理；抗菌谱广，活性高，对很多作物疾病都具有良好的防病治病效果，有效降低防治成本；对环境污染小，有无公害和无残毒的特点，有效避免了化学农药的危害。另外，本发明公开了所述复合微生物可湿性粉剂农药的制备方法及用途。
一种复合微生物可湿性粉剂农药及其制备方法用途

[发明专利]一种防治植物病害的微生物制剂喷施的方法-CN201810612589.9有效
发明人：张克诚;葛蓓孛;刘炳花;麻金金;施李鸣;赵文珺;姜明国 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2018-06-14 - 公布日： 2019-05-17 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供一种防治植物病害的微生物制剂喷施的方法，步骤如下：步骤一：用甲基营养型芽胞杆菌的菌液对待防治的作物进行灌根处理；步骤二：用武夷菌素的菌液对待防治的作用进行叶面喷雾；步骤三：重复步骤一至步骤二总计3‑4次。本发明的有益效果是：武夷菌素与芽胞杆菌二者对蔬菜真菌性病害均具有良好的防治效果，但二者在病害防治中的作用又各有侧重，二者结合，采用甲基营养型芽胞杆菌灌根、武夷菌素叶面喷雾的方式进行实施作业，更大程度地发挥二者对社会作物病害的防治作用，为保护地蔬菜作物的生产提供更为有效的配套施用方式。
武夷菌素芽胞杆菌防治植物病害甲基营养型微生物制剂防治叶面喷雾灌根菌液喷施保护地蔬菜真菌性病害病害防治作物病害施用总计重复配套生产

[发明专利]一种获得武夷菌素高产菌株的方法-CN201810613554.7有效
发明人：葛蓓孛;张克诚;赵文珺;刘炳花;施李鸣;麻金金;姜明国 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2018-06-14 - 公布日： 2019-04-19 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供一种获得武夷菌素高产菌株的方法，包括如下步骤：步骤一，不含整合酶及整合位点的质粒pSET1；步骤二，构建单交换强启动重组载体pSETM；步骤三，构建强启动gouM基因菌株。本发明的有益效果是：强启动cluster5中转运基因能够有效提高gouM基因菌株发酵过程中武夷菌素的产量，加速武夷菌素从体内向体外的转运，高产菌株的发现有助于进一步推进武夷菌素的工业化生产。
武夷菌素高产菌株基因菌株构建发酵过程重组载体转运基因整合酶体外位点整合质粒转运体内交换发现

[发明专利]玫瑰黄链霉菌NKZ-259次级代谢物IAA的鉴定及应用-CN201810238348.2在审
发明人：葛蓓孛;施李鸣;张克诚;麻金金;刘炳花;赵文珺;崔海兰;徐军 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2018-03-22 - 公布日： 2018-09-04 - 主分类号： C12P17/10 文献下载
摘要：本发明提供一种鉴定玫瑰黄链霉菌NKZ‑259的次级代谢产物中存在IAA的方法，包括步骤如下：第一步，根据基因iaaM(Genbank accession No.：NP‑625735)设计引物；第二步，以玫瑰黄链霉菌NKZ‑259的DNA为模板进行基因扩增，将扩增得到的基因与iaaM基因进行比对；第三步，当第二步中扩增基因与iaaM基因相似性大于80％时，利用TLC法或HPLC法检测NKZ‑259菌株次级代谢物中是否存在IAA。本发明的有益效果是：使用分析型色谱仪探索得到合适的液相条件，用制备型色谱仪进行分离收集，快速分离得到IAA纯品。通过发酵罐大量发酵得到发酵液，直接用制备型色谱收集，方便快捷。
玫瑰黄链霉菌次级代谢物次级代谢产物分析型色谱仪制备型色谱仪制备型色谱分离收集基因扩增快速分离扩增基因设计引物液相条件基因发酵罐发酵液种鉴定比对菌株扩增发酵检测应用探索

[发明专利]影响合成武夷菌素的基因簇及筛选鉴定该基因簇的方法和应用-CN201710454648.X有效
发明人：葛蓓孛;张克诚;赵文珺;刘炳花;施李鸣;麻金金 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2017-06-15 - 公布日： 2018-05-29 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明提供一种cluster26基因簇影响武夷菌素的合成；一种快速筛选、鉴定微生物功能基因簇的方法，包括如下步骤：第一步，选择目的基因；第二步，利用Gibson方法构建缺失目的基因的重组基因载体：1)设计目的基因扩增两个同源臂的引物，在引物上设有重叠区；2)对步骤1)中引物序列进行PCR扩增，获得左、右同源臂；3)选取质粒的酶切位点切割质粒，获得线性质粒；4)将步骤2)中的左、右同源臂组装到线性质粒上，得到组装产物；5)利用组装产物大量构建重组基因载体；第三步，利用重组基因载体构建突变株，验证目的基因是否为功能基因。本发明的有益效果是：利用该方法构建重组载体的时间缩短，加快菌株基因选育的进度。
目的基因基因簇构建重组基因载体同源臂组装武夷菌素线性质粒引物合成微生物功能功能基因菌株基因快速筛选酶切位点切割质粒筛选鉴定时间缩短引物序列重组载体突变株重叠区扩增质粒验证进度应用

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