本发明提供一种抗CLEC14A嵌合抗原受体,所述抗原受体,包括CLEC14A单链抗体;所述CLEC14A单链抗体的重链氨基酸序列为SEQ ID NO.7所示,所述CLEC14A单链抗体的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.8所示;本发明所述抗CLEC14A嵌合抗原受体修饰的T细胞,以表达人源化CLEC14A抗原的CHO细胞作为靶细胞进行体外杀伤试验,效靶比为1:1时,IFN‑γ的释放量为3100‑3110 pg/mL,效靶比为5:1时,IFN‑γ的释放量为6945‑6955 pg/mL,效靶比为10:1时,IFN‑γ的释放量为9300‑9310pg/mL,对靶细胞的杀伤效果好,且安全性高。
本发明提供一种抗FLT3嵌合抗原受体修饰的T细胞,将表达抗FLT3嵌合抗原受体的基因片段插入载体获得重组表达载体,采用慢病毒包装后感染活化的T细胞,得到抗FLT3嵌合抗原受体修饰的T细胞;所述嵌合抗原受体包括单链抗体scFv‑FLT3;所述单链抗体的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.3所示;本发明还提供上述嵌合抗原受体修饰的T细胞在制备治疗AML药物中的应用。在效靶比为10:1时,本发明制备的CAR‑AntiFLT3‑T细胞对FLT3+HL‑60细胞的杀伤效率为95.67%,本发明设计的CAR‑AntiFLT3细胞活性受利妥昔单抗的控制,极大的提高CAR技术的临床安全性。
本发明提供一种含有人PD1基因sgRNA的T细胞,所述sgRNA是敲除PD1基因的靶点;所述sgRNA的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8所示;将含有sgRNA的质粒转染到T细胞中,得到含sgRNA的Crispr‑PD1‑T细胞;本发明所述含sgRNA的Crispr‑PD1‑T细胞对PD1基因的敲除率为58.26‑72.67%;对结肠癌细胞系LoVo和宫颈癌HELA细胞系表现出显著的特异性细胞毒性作用并呈现效靶比梯度依赖性即效靶比越高细胞毒性作用越强。