本发明属于基因工程和蛋白质工程技术领域，公开了一种定点突变的α‑葡萄糖苷酶。本发明所述定点突变的α‑葡萄糖苷酶是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的α‑葡萄糖苷酶中制造两个氨基酸取代而产生的；所述的氨基酸取代是第120位和第215位的取代。本发明提供了所述的定点突变的α‑葡萄糖苷酶在制备2‑O‑α‑D‑葡萄糖基‑L‑抗坏血酸中的应用。本发明所述定点突变的α‑葡萄糖苷酶能够降低合成AA‑2G时副产物AA‑6G的含量，且提高了AA‑2G产量，其他酶学性质与野生型酶基本一致。
本发明公开了一种对胰蛋白酶抗性提高的玉米赤霉烯酮水解酶，它是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的来源于粉红螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea)的玉米赤霉烯酮水解酶中制造单个氨基酸取代而产生的、对胰蛋白酶抗性更强的酶，所述的氨基酸取代是第262位的取代。本发明通过蛋白质工程技术对野生型玉米赤霉烯酮水解酶分子内的关键氨基酸残基进行了改造，提供了一种对胰蛋白酶抗性提高的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，该酶对胰蛋白酶的抗性半衰期比野生型玉米赤霉烯酮水解酶延长了20.8％，其他酶学性质与野生型玉米赤霉烯酮水解酶基本一致。
本发明公开了一种对胃蛋白酶抗性提高的α‑淀粉酶，它是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的来源于米曲霉的α‑淀粉酶中制造多个氨基酸取代而产生的、对胃蛋白酶抗性更强的酶，所述的氨基酸取代是第221和375位的氨基酸取代。本发明通过蛋白质工程技术对野生型α‑淀粉酶分子内的关键氨基酸残基进行了改造，提供了一种获得对胃蛋白酶抗性提高的α‑淀粉酶突变体，该酶对胃蛋白酶的抗性半衰期比野生型提高了2.54倍。突变型α‑淀粉酶的胃蛋白酶抗性是野生型α‑淀粉酶的胃蛋白酶抗性的1.42倍。突变型α‑淀粉酶的其他酶学性质与野生型α‑淀粉酶基本一致。
本发明属于生物工程技术领域，涉及一种在高水活度介质中催化合成L‑抗坏血酸油酸酯的方法。本发明所述的在高水活度介质中催化合成L‑抗坏血酸油酸酯的方法，包括以下步骤：以油酸乙酯和L‑抗坏血酸为底物，混合后加入脂肪酶，置于高水活度的水/脂质双相介质中，由重组脂肪酶催化合成L‑抗坏血酸油酸酯；所述重组脂肪酶是基于氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的脂肪酶的重组脂肪酶。本发明首次发现CpLIP2脂肪酶可催化油酸乙酯与L‑抗坏血酸合成L‑抗坏血酸油酸酯，且催化反应可在高水活度(aw0.9)水/脂质双相介质中进行。本发明所述方法能在不含有机溶剂的水性介质中通过脂肪酶生产L‑抗坏血酸油酸酯，反应条件简单，提供了一种有效的生物转化生产绿色油脂的方法。
