本发明属于基因工程和蛋白质工程技术领域，公开了一种定点突变的α‑葡萄糖苷酶。本发明所述定点突变的α‑葡萄糖苷酶是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的α‑葡萄糖苷酶中制造两个氨基酸取代而产生的；所述的氨基酸取代是第120位和第215位的取代。本发明提供了所述的定点突变的α‑葡萄糖苷酶在制备2‑O‑α‑D‑葡萄糖基‑L‑抗坏血酸中的应用。本发明所述定点突变的α‑葡萄糖苷酶能够降低合成AA‑2G时副产物AA‑6G的含量，且提高了AA‑2G产量，其他酶学性质与野生型酶基本一致。
本发明公开了一种对胰蛋白酶抗性提高的玉米赤霉烯酮水解酶，它是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的来源于粉红螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea)的玉米赤霉烯酮水解酶中制造单个氨基酸取代而产生的、对胰蛋白酶抗性更强的酶，所述的氨基酸取代是第262位的取代。本发明通过蛋白质工程技术对野生型玉米赤霉烯酮水解酶分子内的关键氨基酸残基进行了改造，提供了一种对胰蛋白酶抗性提高的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，该酶对胰蛋白酶的抗性半衰期比野生型玉米赤霉烯酮水解酶延长了20.8％，其他酶学性质与野生型玉米赤霉烯酮水解酶基本一致。
本发明公开了一种对胃蛋白酶抗性提高的α‑淀粉酶，它是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的来源于米曲霉的α‑淀粉酶中制造多个氨基酸取代而产生的、对胃蛋白酶抗性更强的酶，所述的氨基酸取代是第221和375位的氨基酸取代。本发明通过蛋白质工程技术对野生型α‑淀粉酶分子内的关键氨基酸残基进行了改造，提供了一种获得对胃蛋白酶抗性提高的α‑淀粉酶突变体，该酶对胃蛋白酶的抗性半衰期比野生型提高了2.54倍。突变型α‑淀粉酶的胃蛋白酶抗性是野生型α‑淀粉酶的胃蛋白酶抗性的1.42倍。突变型α‑淀粉酶的其他酶学性质与野生型α‑淀粉酶基本一致。
