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[发明专利]一种环化文库的快速构建方法及成环接头-CN202080107392.5在审
发明人：于友钱;傅书锦;耿春雨;梁鑫明 -专利权人：深圳华大智造科技股份有限公司
申请日： 2020-12-29 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体公开了一种环化文库构建方法及成环接头。所述方法包括：1)将DNA序列打断成片段；2)使所述打断的片段的两端形成3’端突出；3)利用成环接头将所述3’端突出的片段环化形成环状文库，所述成环接头为不完全配对且两端具有5’端突出的双链，所述成环接头的5’端突出与所述打断的片段的3’端突出互补。本发明通过对打断DNA片段的末修复和加A处理形成末端的A粘性末端，在与特别设计的接头T粘性末端互补形成环化结构，在连接酶的作用下完成缝隙处的连接。
一种环化文库快速构建方法接头

[发明专利]无乙醇洗脱方法及其在建库测序中的应用-CN202211575377.0在审
发明人： 傅书锦;席阳;赵霞;胡豆 -专利权人：深圳华大智造科技股份有限公司
申请日： 2022-12-08 - 公布日： 2023-03-17 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本申请提出了一种无乙醇洗脱的方法及应用，涉及基因测序技术领域，该方法包括：提供磁珠‑待洗脱样品的结合物；和将洗脱液与所述结合物接触，以洗脱所述样品，其中，所述洗脱中不使用乙醇。本申请提出的无乙醇洗脱的方法及应用在各个基于磁珠进行的纯化步骤中省去了乙醇洗涤的步骤，有效减少了操作时间并简化了操作步骤，并且能够保证建库质量和后续测序的数据稳定性。
乙醇洗脱方法及其在建库测序中的应用

[发明专利]一种DNA末端修复与加A的方法-CN201680088992.5有效
发明人：江媛;沈寒婕;李巧玲;魏汉敏;赵霞;张艳艳;王逸丛;陈芳;傅书锦;苏小珊;耿春雨;蒋慧;章文蔚;拉多杰·德马纳克 -专利权人：深圳华大智造科技股份有限公司
申请日： 2016-11-21 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：一种DNA末端修复与加A的方法，该方法包括：在同一反应体系中，在dNTP存在下，利用聚合酶将片段化DNA的末端补平或切平，利用多聚核苷酸激酶将5’羟基转变成5’磷酸基团且将3’磷酸基团转变成3’羟基；在过量dATP存在下，利用不具有3’‑5’外切活性的聚合酶在双链DNA 3’末端加上dATP。所述方法能够在同一个反应体系中实现DNA末端修复与加A反应，简化酶反应和纯化步骤，提高起始DNA转化成可连接接头DNA的效率，降低对起始DNA总量的要求。
一种 dna 末端修复方法

[发明专利]一种接头元件和使用其构建测序文库的方法-CN201480081517.6有效
发明人：江媛;赵霞;耿春雨;傅书锦;贺玲瑜;苏小珊;吴凡子;李雅乔;章文蔚;蒋慧;阿莱克谢耶夫安德烈;徳马纳克拉多杰 -专利权人：深圳华大智造科技股份有限公司
申请日： 2014-10-14 - 公布日： 2021-01-15 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：提供了一种接头元件和使用该接头元件构建测序文库的方法，所述接头元件由接头A和接头B组成；接头A由一条核酸长链与一条核酸短链互补配对而成，长链5’端具有磷酸修饰，短链3’端为封闭修饰，短链中具有酶作用位点；接头B为一条核酸单链，其3’端能与接头A长链5’端互补配对；所述接头A的长链和接头B中具有II型限制性内切酶识别位点。使用本发明的接头元件构建测序文库时，在保证接头连接方向性的同时，解决了片段互连、接头自连、连接效率低的问题，减少了步骤间的纯化反应，缩短了连接时间，降低了成本。
一种接头元件使用构建序文方法

[发明专利]分离的寡核苷酸及其在核酸测序中的用途-CN201480081861.5有效
发明人：耿春雨;巴林杰丹尼斯·G.;张艳艳;傅书锦;贺玲瑜;章文蔚;蒋慧 -专利权人：深圳华大智造科技有限公司
申请日： 2014-09-12 - 公布日： 2020-11-03 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：提供了分离的寡核苷酸及其在核酸测序中的用途，该分离的寡核苷酸包括：第一链，所述第一链的5’末端核苷酸具有磷酸基团，并且所述第一链的3’末端核苷酸为双脱氧核苷酸；以及第二链，所述第二链的5’末端核苷酸不具有磷酸基团，并且所述第二链的3’末端核苷酸为双脱氧核苷酸，其中，所述第一链的长度大于所述第二链的长度，并且所述第一链和所述第二链之间形成双链结构。
分离寡核苷酸及其核酸中的用途

[发明专利]核酸文库构建方法、得到的核酸文库及其用途-CN201811623521.7在审
发明人：耿春雨;张开;杨心石;李艳;傅书锦;陈芳;蒋慧 -专利权人：深圳华大智造科技有限公司
申请日： 2018-12-28 - 公布日： 2020-07-07 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：一种核酸文库构建方法、得到的核酸文库及其用途，该方法包括：使用转座酶将核酸打断成片段，同时在打断的片段两端连接上转座子序列，转座子序列上带有生物素标记；通过链置换反应补平转座子序列与打断的片段之间的缺口，得到完整的双链核酸片段；使上一步得到的双链核酸片段环化成环状核酸片段；使用链霉素亲和性磁珠结合带有生物素标记的环状核酸片段；使用打断酶对结合在链霉素亲和性磁珠上的环状核酸片段进行打断，然后进行磁分离得到结合在链霉素亲和性磁珠上的片段。本发明针对大片段文库、满足低起始量要求，能够彻底摆脱物理打断所需的昂贵设备，其优选方案能够构建成单链环状文库，并使这种文库能用于二代测序。
核酸文库构建方法得到及其用途

[发明专利]一种接头元件和使用其构建测序文库的方法-CN201480081525.0有效
发明人：江媛;耿春雨;赵霞;傅书锦;贺玲瑜;李雅乔;苏小珊;吴凡子;章文蔚;蒋慧;阿莱克谢耶夫安德烈;徳马纳克拉多杰 -专利权人：深圳华大智造科技有限公司
申请日： 2014-10-14 - 公布日： 2020-03-24 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：提供了一种接头元件和使用该接头元件构建测序文库的方法，所述接头元件由接头A和接头B组成；接头A由一条核酸长链与一条核酸短链互补配对而成，长链5’端具有磷酸修饰，短链3’端为封闭修饰，短链中具有酶作用位点；接头B为一条核酸单链，其3’端能与接头A长链5’端互补配对。使用本发明的接头元件构建测序文库时，在保证接头连接方向性的同时，解决了片段互连、接头自连、连接效率低的问题，减少了步骤间的纯化反应，缩短了连接时间，降低了成本。
一种接头元件使用构建序文方法

[发明专利]一种用于无创产前检测的文库构建方法及试剂盒-CN201710183553.9在审
发明人：张艳艳;江媛;李巧玲;魏汉敏;赵霞;董超;沈寒婕;田凯;于竞;傅书锦;苏小珊;耿春雨 -专利权人：深圳华大基因科技有限公司
申请日： 2017-03-24 - 公布日： 2018-05-29 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于无创产前检测的文库构建方法及试剂盒。本发明的方法包括：在同一反应体系中，在dNTP和额外dATP存在下，利用聚合酶、多聚核苷酸激酶和不具有3’‑5’外切活性的聚合酶对片段化DNA进行末端修复与加A；然后进行加接头以及纯化、PCR和环化。本发明的方法，大大缩短建库时间，提升高通量建库技术应用到无创产前检测等医学临床检测项目的实效，并且降低起始DNA在建库过程的损耗，降低PCR扩增的循环数，从而提高可用数据比率，降低数据碱基偏向性，并且能实现无需PCR的建库。可以广泛实现不同类型微量起始DNA的快速建库，并且可以应用于BGISEQ、illumina等多种测序平台。
建库无创检测文库构建起始DNA 聚合酶试剂盒多聚核苷酸片段化DNA 测序平台建库技术可用数据末端修复医学临床激酶高通量偏向性循环数环化碱基外切应用

[发明专利]一种基于分子反向探针的测序文库构建方法和试剂-CN201510971452.9有效
发明人：耿春雨;于源;李梅艳;郭晶;蒋慧;章文蔚;郭荣荣;傅书锦;田凯;安丹;贺玲瑜 -专利权人：深圳华大基因研究院;深圳华大基因科技有限公司
申请日： 2015-12-22 - 公布日： 2018-01-23 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于分子反向探针的测序文库构建方法和试剂，该方法包括用分子反向探针与变性核酸进行退火杂交，分子反向探针包括5’端的锚定序列和3’端的延伸序列以及二者之间的测序接头序列，锚定序列和延伸序列分别与变性核酸中的目标区域两端的序列反向互补；以目标区域为模板，从3’端的延伸序列开始进行聚合反应，生成目标区域的互补序列；将5’端的锚定序列与目标区域的互补序列连接形成环状核酸分子；使用核酸外切酶消化未环化的线性分子，得到含有目标区域的单链环状分子。将得到的单链环状分子进行测序，从而实现对目标区域捕获测序。本发明的方法实现将单链环状文库构建和目标区域捕获融为一体，从而大大缩减建库流程和周期。
一种基于分子反向探针序文构建方法试剂

[实用新型]除臭散热鞋-CN200520058583.X无效
发明人： 傅书锦 -专利权人： 傅书锦
申请日： 2005-05-16 - 公布日： 2006-11-15 - 主分类号： A43B7/08 文献下载
摘要：一种除臭散热鞋，它包括鞋帮与鞋底，鞋帮固接在鞋底上，鞋帮前端沿与鞋底前端沿的连接方式为可开启的连接方式。所述可开启的连接方式可为拉链或用粘贴布将鞋帮前端与鞋底前端连在一起；在脚前掌所对应的鞋底上有一端与鞋子内空相通，另一端与大气相通的散热气孔。由于本实用型采用了鞋帮前端沿与鞋底前端沿的连接方式为可开启的连接方式，这样，当鞋内潮湿时，只需将鞋帮前端沿打开，掀起来，就可直接排汗或排臭；采用了在脚前掌所对应的鞋底上有一端与鞋子内空相通，另一端与大气相通的散热气孔的结构，这样也可以通过散热气孔排出部分湿气和臭气。
除臭散热

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