本发明公开了一种真核生物来源的Argonaute蛋白及其应用,所述Argonaute蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,或与如SEQ ID NO.1所示序列有至少50%的序列一致性;本发明首次证明了真核Argonaute蛋白对DNA的特异性切割活性,为真核Argonaute与DNA的相互作用研究提供了实验证明;同时,本发明使用的多肽、核酸、表达载体、组合物、试剂盒和方法能够对细胞内和细胞外的遗传物质进行位点特异性操作,可有效地应用于生物技术的许多领域,为基于真核生物来源的Argonaute多肽的基因编辑、修饰及分子检测提供了一种新的工具。
本发明公开了一种原核生物来源的Mbp_Argonaute蛋白及其应用,所述Mbp_Argonaute蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或如与SEQ ID NO:1具有至少50%或至少80%同源性的序列所示。本发明合成了一种来源于耐冷原核生物Mucilaginibacter paludis的Argonaute蛋白基因,将该蛋白命名为MbpAgo,研究发现该MbpAgo对单链向导DNA具有结合活性,并且对与单链向导DNA互补配对的靶RNA和/或靶DNA具有核酸酶活性,因此可利用所述MbpAgo进行体内外靶向RNA编辑,进而对遗传材料进行特异性位点修饰。所述MbpAgo不仅可对高级结构的RNA进行修饰,而且不会影响动植物细胞的内源RNAi途径,为RNA编辑提供了一个全新的有力工具,并且切割活性强,特异性好。
本发明提供了一种用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒与方法,所述试剂盒包括(1)SNP位点的上下游引物组:分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示;(2)DNA guides:分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12所示;(3)不同荧光基团标记的分子信标:如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16所示;(4)DNA编辑酶PfAgo;该方法特异性强,灵敏度高。