本发明公开了一种中高温Argonaute蛋白在特异性切割靶核酸中的应用，所述Argonaute蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该Argonaute蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供了上述Argonaute蛋白的体外合成方法，并发现该蛋白对两种向导5’OH‑gRNA和5’P‑gRNA具有结合活性，其能够利用这两种向导去切割靶ssDNA和利用5’OH‑gRNA去切割靶RNA，实现靶向DNA或靶向RNA编辑，同时还可切割质粒。因此，本发明为基于原核生物来源的Argonaute蛋白的基因克隆和分子检测提供了一种新的工具。
本发明公开了具有中温靶核酸切割活性的PfAgo突变体蛋白及其应用，所述PfAgo突变体蛋白相对于SEQ ID NO.1所示序列，具有第617位和/或618位的氨基酸突变，具体为：K617E/G和/或L618Y/F/W/G。相对于野生型PfAgo蛋白，本发明提供的PfAgo突变体蛋白在30～95℃的温度范围均有活性，有效扩展了pAgo蛋白的使用范围。
