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[发明专利]一种转化支链氨基酸的工程菌及在制备治疗枫糖尿症产品中的应用-CN202210170368.7有效
发明人：曹广祥;付加芳;马欣;王杰 -专利权人：山东第一医科大学（山东省医学科学院）
申请日： 2022-02-23 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种转化支链氨基酸的工程菌及其在制备治疗枫糖尿症产品中的应用。本发明构建了包含基因LeuDH和基因MorA的载体，通过同源重组方式将其转入乳杆菌。经验证上述重组菌株能够有效表达亮氨酸脱氢酶及α‑羟基酸脱氢酶，并实现对支链氨基酸的降解作用，有望作为工程菌应用于枫糖尿症治疗药物的制备，对于枫糖尿症的临床治疗具有重要意义。
一种转化氨基酸工程制备治疗枫糖产品中的应用

[发明专利]治疗苯丙酮尿症的工程益生菌及其构建方法与应用-CN202111347505.1有效
发明人： 付加芳;曹广祥;马欣;王杰;林赓 -专利权人：山东第一医科大学（山东省医学科学院）
申请日： 2021-11-15 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： C12N15/60 文献下载
摘要：本发明涉及医药领域和生物技术领域，具体涉及治疗苯丙酮尿症的工程益生菌及其构建方法与应用；所述重组表达载体包括重组表达载体一和重组表达载体二；所述重组表达载体一为包含苯丙氨酸氨裂合酶基因PAL核苷酸序列、蛋白质分泌加工结构域编码基因prtP核苷酸序列和嗜酸乳杆菌组成型启动子SL的表达载体；所述重组表达载体二为包含苯丙氨酸氨裂合酶基因PAL核苷酸序列，苯丙氨酸转运泵基因pheP和嗜酸乳杆菌组成型启动子SL的表达载体；首次构建在胃肠道中能够分泌苯丙氨酸氨裂合酶到菌体外的工程益生菌，有效降解胃肠道中被消化食物中的苯丙氨酸，降低患者的苯丙氨酸摄取量，用于治疗PKU。
治疗丙酮工程益生菌及其构建方法应用

[发明专利]一种通过提前激活纳他霉素合成来提高纳他霉素发酵产量的方法-CN202210734895.6有效
发明人：颜文秀;陈曦;辛璐璐;宗工理;曹广祥;付加芳;张佩佩;刘士理 -专利权人：山东第一医科大学（山东省医学科学院）
申请日： 2022-06-27 - 公布日： 2023-06-16 - 主分类号： C12P19/62 文献下载
摘要：本发明涉及一种通过提前激活纳他霉素合成来提高纳他霉素发酵产量的方法。包括：采用低氮源发酵培养基进行纳他霉素发酵，在发酵至64～80h后，按照培养基体积的8～12％补加含高氮源母液，继续发酵，得到纳他霉素。本发明先采用低氮源发酵培养基进行纳他霉素的前中期发酵，然后再向低氮源发酵培养基中添加高氮源母液，依据纳他霉素合成阶段性的特点，有效地提高了纳他霉素的产量，使得摇瓶发酵产量最高为2.95g/L。采取扩大生产后，在1L发酵体系中，纳他霉素产量为7.88g/L，显著高于正常发酵生产的6.03g/L，纳他霉素产量提高达到了20.73％。
一种通过提前激活霉素合成提高发酵产量方法

[发明专利]一种用于治疗精氨酸酶缺乏症的工程益生菌及其构建方法和应用-CN202210808786.4在审
发明人：张佩佩;曹广祥;宗工理;付加芳 -专利权人：山东第一医科大学（山东省医学科学院）
申请日： 2022-07-11 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供一种用于治疗精氨酸酶缺乏症的工程益生菌及其构建方法和应用，属于生物技术领域。本发明通过基因工程的手段对E.coli Nissle1917(EcN 1917)菌株进行改造，筛选不同启动子条件下精氨酸酶的表达情况，构建出能够有效表达精氨酸酶的大肠杆菌工程益生菌。该益生菌可定殖在肠道中并降解肠道被消化食物中的精氨酸，动物实验证实精氨酸酶缺乏症小鼠口服该菌株后血液中精氨酸浓度显著降低，因此有潜力开发成用于治疗精氨酸酶缺乏症的工程益生菌，具有重要的临床治疗价值和社会效益。
一种用于治疗精氨酸缺乏工程益生菌及其构建方法应用

[发明专利]α-侧柏酮在制备治疗碳青霉烯类抗生素耐药菌感染药物中的应用-CN202211063685.5在审
发明人： 付加芳;曹广祥;宗工理;张佩佩 -专利权人：山东第一医科大学（山东省医学科学院）
申请日： 2022-08-31 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： A61K31/122 文献下载
摘要：本发明属于医药技术领域，具体涉及α‑侧柏酮在制备治疗碳青霉烯类抗生素耐药菌感染药物中的应用。本发明通过研究发现，化合物α‑侧柏酮与碳青霉烯类抗生素联合使用时，能够对碳青霉烯类抗生素耐药菌产生协同抗菌作用，从而显著提高碳青霉烯类抗生素耐药菌感染相关疾病的治疗效果，同时进一步研究α‑侧柏酮抑制碳青霉烯类抗生素美罗培南耐药基因的耐药功能，从机制上阐明了其抗菌作用，有望应用于严重细菌感染的临床治疗，因此本发明具有重要的临床意义和社会效益。
侧柏制备治疗青霉抗生素耐药感染药物中的应用

[发明专利]一种治疗多重耐药菌感染的药物组合物及其应用-CN202211029794.5在审
发明人：曹广祥;付加芳;宗工理;张佩佩 -专利权人：山东第一医科大学（山东省医学科学院）
申请日： 2022-08-25 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： A61K31/352 文献下载
摘要：本发明属于生物医药技术领域，涉及一种治疗多重耐药菌感染的药物组合物及其应用。药物组合物包括多粘菌素和光甘草定。本发明研究发现，光甘草定可作为多粘菌素外排泵抑制剂，用于与多粘菌素联合应用治疗多重耐药菌感染。在多粘菌素各类制剂中添加光甘草定，可以明显降低耐药菌的最低抑菌浓度，增效多粘菌素对耐药菌的抑菌效果。本发明提供了光甘草定和多粘菌素联合用药策略，维持多粘菌素的疗效，具有重要的药物研发和临床应用价值。
一种治疗多重耐药感染药物组合及其应用

[发明专利]一种基于2+N策略构建多靶点gRNA表达载体的方法及其应用-CN202211150602.6在审
发明人：张之勇;付加芳;李佳起;鞠思雨;孙文娟;杨华;陈元;王志毅;成丽娟;刁玉涛;王晰;崔世钰;刘兆锴 -专利权人：山东省医学科学院基础医学研究所
申请日： 2022-09-21 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N15/64 文献下载
摘要：本发明属于基因编辑技术领域，具体涉及一种基于2+N策略构建多靶点gRNA表达载体的方法及其应用。本发明通过PCR获得单gRNA表达模块，并亚克隆至克隆载体中。通过定点突变法快速置换克隆载体中的gRNA碱基序列。通过同源重组的方法一次性串联双gRNA表达模块，双gRNA表达模块之间引入新的限制性酶切位点，构建双gRNA表达载体。利用同源臂上的限制性酶切位点线性化表达载体，在相邻的双gRNA表达模块间添加新的限制性酶切位点，基于同源重组，完成2+N个多gRNA表达载体的构建。此方法适用于构建可以同时表达多个gRNA的表达载体，从而一次性的编辑一个或多个靶基因，在多基因联合作用机制研究中有重要意义。
一种基于策略构建多靶点 grna 表达载体方法及其应用

[发明专利]一种道路施工用的路面质量检测装置-CN202210781402.4在审
发明人：浮桂玲;李永宁;付加芳;浮桂丽 -专利权人：河南益祥建筑工程有限公司
申请日： 2022-07-04 - 公布日： 2022-09-23 - 主分类号： G01B21/30 文献下载
摘要：本发明涉及道路施工技术领域，尤其涉及一种道路施工用的路面质量检测装置，包括承载板，所述承载板的一侧设有控制器，所述承载板的顶部中心处开设有限位槽，所述限位槽的底部中心处开设有贯穿承载板的通孔，所述限位槽的内部安装有检测设备；所述承载板的一端设有推板，所述推板的底部设有位移传感器，所述推板的一侧顶部中心处开设有贯穿推板的安装槽，所述安装槽的内部可拆卸设有吹风机，所述吹风机的输出端可拆卸设有出风管，本发明结构合理，便于移动的同时对路上的砂石进行清理，保证检测设备的作业准确性，省时省力，便于使用，同时还能自适应调节推板高度，且装置侧翻时对检测设备进行弹性包裹保护，适应性强，安全稳定。
一种道路施工路面质量检测装置

[发明专利]一种用于评估慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病的肠道生物标志物及其应用-CN202210726781.7在审
发明人： 付加芳;曹广祥 -专利权人：山东第一医科大学（山东省医学科学院）
申请日： 2022-06-24 - 公布日： 2022-09-23 - 主分类号： C12Q1/6883 文献下载
摘要：本发明属于疾病检测和生物医药技术领域，具体涉及一种用于评估慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病的肠道生物标志物及其应用。本发明首次发现肠道中微生物Klebsiella pneumoniae、Escherichia coli、Megamonas funiformis或Phascolarctobacterium faecium与慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病(CIDP)相关，其丰度在CIDP患者和健康人群中呈现显著差异性，可以将Klebsiella pneumoniae、Escherichia coli、Megamonas funiformis或Phascolarctobacterium faecium作为检测标志物应用于CIDP患者诊断或患病风险评估，因此具有良好的实际应用之价值。
一种用于评估慢性脱髓鞘多发性神经神经病肠道生物标志及其应用

[发明专利]一种建筑工程施工用混凝土浇筑设备-CN202210734604.3在审
发明人：李永宁;浮东平;浮桂玲;付加芳 -专利权人：河南益祥建筑工程有限公司
申请日： 2022-06-27 - 公布日： 2022-09-20 - 主分类号： B28C5/16 文献下载
摘要：本发明涉及建筑工程施工技术领域，尤其涉及一种建筑工程施工用混凝土浇筑设备，包括底板，底板一侧设有控制器，所述底板的顶部一侧设有外壳，且外壳的内腔底部设有搅拌仓，所述搅拌仓内腔底部设有压力传感器，所述搅拌仓的顶部中心位置处安装有旋转电机，且旋转电机的底部传动连接有贯穿搅拌仓的搅拌机构；所述搅拌机构包括转轴，所述转轴一端与旋转电机的输出端固定连接，所述转轴的另一端与搅拌仓的内腔底部转动连接，本发明解决了如若不及时清理，非常容易出现出料端口被凝固后的混凝土堵塞的问题，节省了人员的体力，提高了装置的实际使用效率，同时混凝土的浇筑量精度高，提高对搅拌仓内的混凝土排出速率和刮除完整彻底性。
一种建筑工程施工混凝土浇筑设备

[发明专利]一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法-CN202110867619.2在审
发明人：宗工理;曹广祥;付加芳;张佩佩;陈曦 -专利权人：山东省医药生物技术研究中心（山东省病毒研究所）
申请日： 2021-07-28 - 公布日： 2021-10-08 - 主分类号： C12P19/62 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法。将发酵结束后的纳他霉素发酵液通过离心收集上清液，得到纳他霉素发酵副产物；然后在纳他霉素发酵0～48h后，按照发酵培养基体积的2.5～7.5％，将纳他霉素发酵副产物添加至发酵培养基中，继续发酵，得纳他霉素。经本发明的方法得到的纳他霉素摇瓶发酵产量最高为2.40±0.17g/L。采取扩大生产后，在1L发酵体系中，发酵24h后添加5％的纳他霉素发酵副产物，其纳他霉素产量为8.83～8.86g/L，显著高于未添加纳他霉素发酵副产物的6.70～6.72g/L。
一种利用霉素发酵副产物提高产量方法

[发明专利]一种重组可溶性人源骨靶向干扰素γ-1b及其制备方法-CN201810259860.5有效
发明人：王志宇;曹广祥;付加芳;宗工理;王世立 -专利权人：山东省医药生物技术研究中心（山东省病毒研究所）
申请日： 2018-03-27 - 公布日： 2020-10-02 - 主分类号： C07K14/57 文献下载
摘要：本发明提供一种重组可溶性人源骨靶向干扰素γ‑1b及其制备方法。其氨基酸序列包括重组干扰素γ‑1b或其活性片段和骨靶向分子；所述骨靶向分子为针对成骨样干细胞筛选出的多肽适配子。本发明将骨靶向分子与干扰素γ‑1b相融合，利用骨靶向分子的骨靶向特性，使干扰素γ‑1b在骨组织内富集，从而提高干扰素γ‑1b治疗骨组织疾病的特异性，减少用药量，降低毒副作用。同时，采用定点突变技术原理，替换干扰素γ‑1b氨基酸序列中位于关键位点的疏水性氨基酸，并进一步采用大肠杆菌偏爱密码子，通过诱导条件的优化，最终实现了干扰素的可溶性表达，大幅度提高了干扰素γ‑1b的生物学活性，制备方法简单，具有良好的应用开发前景。
一种重组可溶性人源骨靶向干扰素及其制备方法

[发明专利]一种骨肉瘤细胞的无血清培养基及其制备方法-CN201710377297.7有效
发明人：曹广祥;付加芳;王志宇;钟传青;宗工理 -专利权人：山东省医药生物技术研究中心
申请日： 2017-05-25 - 公布日： 2020-05-26 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种骨肉瘤细胞的无血清培养基，由碳水化合物、氨基酸、核苷酸、维生素、无机盐、微量元素和添加物组成；所述添加物是由终浓度为10‑100mg/L透明质酸、1‑10mg/L吐温‑80、0.1‑10mg/L绿原酸和0.5mg/L酚红组成。本发明首次提供了一种适用于骨肉瘤细胞大规模悬浮培养的无血清培养基，本发明的无血清培养基能适用于骨肉瘤细胞高密度悬浮培养和表达重组蛋白，本发明的无血清培养基中化学成分明确，制备简单，能够重复性地人工配制并且质量稳定，同时生产成本较低，为利用骨肉瘤细胞表达重组蛋白的规模化生产提供一种成本低廉的培养方法。
一种骨肉细胞血清培养基及其制备方法

[发明专利]一种超表达内源性溶菌酶的菌株的构建方法及构建的菌株与应用-CN201610872882.X有效
发明人：钟传青;曹广祥;付加芳;宗工理 -专利权人：山东建筑大学;山东省医药生物技术研究中心
申请日： 2016-09-30 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N15/76 文献下载
摘要：本发明公开了一种超表达内源性溶菌酶的菌株的构建方法，步骤如下：首先构建内源性溶菌酶的超表达载体，然后将超表达载体通过接合转移转入至出发菌株中，筛选得到内源性溶菌酶超表达的基因工程菌。本发明采用超表达技术，通过高表达内源性溶菌酶基因，改善工业菌株的细胞通透性，增强营养物质的摄取和次级代谢产物的分泌效率，最终提高了代谢产物的表达水平。本发明首次提出将该菌株的构建方法应用于工业微生物的菌种改造，为微生物育种提供了一条全新的方法。
一种表达内源性溶菌酶菌株构建方法应用

[发明专利]人碱性磷酸酶糖蛋白的癌细胞高效表达系统及其应用-CN201710024278.6有效
发明人：曹广祥;付加芳;马军霞;王志宇;宗工理;王世立 -专利权人：山东省医药生物技术研究中心
申请日： 2017-01-13 - 公布日： 2019-07-02 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种人骨肉瘤细胞系MG‑63在外源表达人碱性磷酸酶糖蛋白中的应用，以及rhALP的外源表达方法，包括如下步骤：(1)构建含有rhALP的重组质粒；(2)将重组质粒整合至人骨肉瘤MG‑63细胞内，获得能够表达rhALP的人骨肉瘤MG‑63细胞；(3)培养上述能够表达rhALP的人骨肉瘤MG‑63细胞，提取目的蛋白。本发明利用癌细胞MG‑63快速增殖及糖基化修饰系统的特性，通过基因工程技术利用人源癌细胞表达重组人碱性磷酸酶rhALP。本发明构建rhALP的重组表达载体，筛选能高效表达rhALP的MG‑63细胞；纯化并检测重组rhALP的糖基化状态及其生物学活性。重组rhALP的表达量和活性得到了极大的提高。
碱性磷酸酶糖蛋白癌细胞高效表达系统及其应用

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