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[发明专利]一种猪SCD基因家族成员双基因突变细胞、突变细胞系及突变动物的构建方法-CN202310186362.3在审
发明人：毕延震;方钱海;任红艳;顾浩;陈矾;周昌繁 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2023-03-02 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明提供了一种猪SCD基因家族成员双基因突变细胞、突变细胞系及突变动物的构建方法，涉及生物医学技术领域。本发明从猪SCD1基因中分离出1个基因编辑靶位点，从猪SCD5基因中分离出2个基因编辑靶位点，均可应用于基因编辑。统计结果表明，以上位点的打靶效率分别为90％和82％。提供的猪SCD1和SCD5双基因编辑位点为对猪硬脂酰辅酶A去饱和酶基因家族成员进行精确编辑提供了有效靶标，同时提供了一个猪SCD1和SCD5双基因突变的细胞模型，为脂质代谢及猪种肉质改良提供了可靠的研究材料，也为优良肉质猪品种的研究和开发提供了新策略。
种猪 scd 基因家族成员基因突变细胞突变细胞系动物构建方法

[发明专利]一种成纤维细胞基因转染方法-CN202310436265.5在审
发明人：张立苹;肖红卫;毕延震;任红艳;华再东;顾浩;陈矾;周昌繁 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2023-04-21 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N15/89 文献下载
摘要：本发明公开了一种成纤维细胞基因转染方法，所述方法包括：获得细胞浓度为1～2个/uL的成纤维细胞悬液，将所述成纤维细胞悬液于细胞培养皿中制备细胞悬液微滴，每个所述细胞悬液微滴由体积为10±0.5uL的所述成纤维细胞悬液形成；将所述含有细胞悬液微滴的细胞培养皿于套皿微环境中孵育，细胞贴壁后加入细胞培养基培养；获得浓度为150～200ng/uL的含有线性化目的基因的质粒溶液；将所述质粒溶液吸入注射针中，调整所述注射针与水平面所成夹角的角度为30～60°，依次向每个所述细胞注射；注射后进行单细胞培养，获得稳定转染的转基因细胞克隆。获得不带筛选标记细胞系的目的，同时能够实现高效率的稳转。
一种纤维细胞基因转染方法

[发明专利]靶向切除猪SlamF1基因编码区DNA的成对编辑位点、使用方法及其应用-CN202310331335.0在审
发明人：张立苹;毕延震;华再东;任红艳;肖红卫;顾浩;陈矾;方钱海;周昌繁 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2023-03-30 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术和基因工程的技术领域，具体涉及一种靶向切除猪SlamF1基因编码区DNA的成对编辑位点、使用方法及其应用，所述猪SlamF1基因编辑位点包括T1和T2两个编辑位点，该两个编辑位点位于猪4号染色体SlamF1基因编码区的第1外显子区域。本发明提供的两个能基于CRISPR技术有效编辑猪SlamF1基因的靶位点，该靶位点可用于Cas9介导的猪SlamF1基因打靶，并能够将SlamF1基因功能失活，为研究SlamF1基因在猪抗病育种中的功能验证、在猪疾病抗性中的作用机制提供实验材料。
靶向切除 slamf1 基因编码 dna 成对编辑使用方法及其应用

[发明专利]ACVR2B在调控猪产肉性能中的应用及改良猪产肉性能的方法-CN202210874272.9在审
发明人：毕延震;陈矾;顾浩;任红艳 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2022-07-22 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供了ACVR2B在调控猪产肉性能中的应用及改良猪产肉性能的方法，属于基因干扰和基因敲除技术领域。本发明首次提出ACVR2B具有调控猪骨骼肌卫星细胞增殖分化的作用，采用本发明提供的siRNA干扰骨骼肌卫星细胞24h，ACVR2B的mRNA丰度显著下降，肌细胞增殖发育相关基因MyoD和MyoG的mRNA丰度显著上升；干扰48h后，ACVR2B的蛋白表达水平显著下降，MyoD和MyoG的蛋白表达水平显著上调。采用本发明构建的CRISPR/Cas9系统能够成功靶向敲除猪ACVR2B基因，在转录水平上，敲除后的单克隆细胞相较于对照组ACVR2B的mRNA丰度显著下降。
acvr2b 调控猪产肉性能中的应用改良方法

[发明专利]猪精液冷冻保护剂、制备方法、冷冻及解冻方法和应用-CN202211516735.0在审
发明人：肖红卫;华再东;张立苹;陈矾;周昌繁;任红艳;毕延震 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2022-11-29 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪精液冷冻保护剂、制备方法、冷冻及解冻方法和应用，涉及猪精液冷冻保护技术领域。所述冷冻保护剂包括渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂，所述渗透性冷冻保护剂包括甘油、DMSO和异丙醇；所述非渗透性冷冻保护剂包括PVP、吐温20、Triton‑100和SDS，且渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂的体积比为1:1。本发明利用渗透性冷冻保护剂与非渗透性冷冻保护剂联合使用，可以充分保护精子的顶体、线粒体完整性，提高精子配种率，解冻后精液活力优于其它猪冻精。采用本发明的稀释剂用于猪冷冻精液的生产，解冻后精子活力达85％以上，顶体完整率达85％以上，质膜完整率80以上，线粒体活性达80％以上，畸形率10％以下。
精液冷冻保护制备方法解冻应用

[发明专利]一种靶向敲除猪MSTN的sgRNA及其单碱基编辑系统与应用-CN202210835106.8在审
发明人：朱喆;顾浩;陈矾;任红艳;毕延震 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2022-07-15 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明提供了一种靶向敲除猪MSTN的sgRNA及其单碱基编辑系统与应用，属于基因敲除技术领域，所述sgRNA的核苷酸序列为5′‑GGCACTGGTATTTGGCAGAGC‑3′，所述猪MSTN的sgRNA以第2外显子为打靶区域，能够精准、快速靶向猪MSTN基因，从而能够保证后续猪MSTN基因发生定点突变，达到敲除猪MSTN基因的目的。本发明利用单碱基编辑器在猪MSTN基因第2外显子处成功引入终止密码子，实现定点编辑，为后期生产瘦肉率高的碱基突变猪奠定基础。本发明成功获得了猪MSTN敲除的单克隆细胞，为以后单碱基编辑在大型动物育种上提供了方向，得到的基因缺失单克隆细胞株为动物模型的建立提供了优秀的实验素材，对单碱基编辑猪的培育具有重要意义。
一种靶向 mstn sgrna 及其碱基编辑系统应用

[发明专利]一种靶向切除猪CD164基因编码区DNA的成对编辑位点、使用方法及其应用-CN202111002995.1在审
发明人：张立苹;毕延震;华再东;任红艳;朱喆;顾浩;陈矾 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2021-08-30 - 公布日： 2021-11-19 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术和基因工程的技术领域，具体涉及一种靶向切除猪CD164基因编码区DNA的成对编辑位点、使用方法及其应用，所述编辑位点包括T1和T2两个编辑位点，所述T1和T2两个编辑位点位于猪1号染色体CD164基因编码区的2外显子区域；其中T1编辑位点染色体坐标为75441814‑75441833，编码区坐标为246‑265；T2编辑位点染色体坐标为75442009‑75442028，编码区坐标为441‑460。本发明的两个能基于CRISPR技术有效编辑猪CD164基因的靶位点，可用于Cas9介导的猪CD164基因打靶，为研究CD164基因在猪抗病育种中提供实验材料。
一种靶向切除 cd164 基因编码 dna 成对编辑使用方法及其应用

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