本发明公开了一种PCR检测和分型禽腺病毒血清4型的试剂盒及其检测方法,本发明的一种PCR检测和分型禽腺病毒血清4型的试剂盒,包括引物和标准品,所述的引物为上游引物与下游引物。所述的上游引物具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列;所述的下游引物具有SEQ ID NO.2的核苷酸序列;上游引物设计于禽腺病毒基因组ITR基因序列10bp~50bp区间,下游引物设计于ORF0基因序列546bp~606bp区间。本发明操作便捷,适合于检测大量样本,可以快速,高度灵敏、特异、快速检测的禽腺病毒血清4型。为禽腺病毒血清4型爆发时的快速、准确地诊断大批临床样品,并尽快地控制本病提供了技术手段。