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[发明专利]一种高灵敏梯度半定量免疫层析检测试纸条及检测方法-CN202110272752.3有效
发明人：张改平;孙亚宁;杨苏珍;杨继飞;郭军庆;王方雨;胡骁飞;邢云瑞;邓瑞广 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2021-03-13 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： G01N33/558 文献下载
摘要：本发明涉及一种高灵敏梯度半定量免疫层析检测试纸条，包括试纸和样品杯；试纸包括支撑层、吸附层和保护层；吸附层依次为样品垫、结合垫、纤维素膜层及吸水材料层；纤维素膜层上设置有检测线T1、检测线T2和质控线；结合垫采用吸附有纳米材料标记抗原的玻璃纤维棉制成；样品杯为稀释样品所用容器，样品杯内预固定有金标蛋白重悬液稀释的靶标物单克隆抗体。该试纸检测方法可以制备两条互不干扰的检测线，实现梯度半定量；且抗体独立干燥于样品杯中，避免了抗体标记过程中的折叠及损伤，并可精确控制抗体用量；以纳米颗粒标记人工抗原作为探针，检测线T2上拦截的每个抗体都能精准结合两个标记抗原，实现了信号自放大，与传统方法相比灵敏度更高。
一种灵敏梯度定量免疫层析检测试纸方法

[发明专利]一种去除大肠杆菌重组表达猪细小病毒VP2蛋白中内毒素的方法-CN202010515345.6有效
发明人：刘运超;张改平;王聚财;陈玉梅;尚延丽;王方雨;魏蔷;冯华;杨苏珍;柴书军;金前跃;邓瑞广 -专利权人：河南省农业科学院;河南中泽生物工程有限公司
申请日： 2020-06-09 - 公布日： 2023-03-17 - 主分类号： C07K14/015 文献下载
摘要：本发明提供一种去除大肠杆菌表达重组猪细小病毒VP2蛋白中内毒素的方法，包括猪细小病毒重组VP2蛋白抗原溶液制备、氢氧化铝悬液制备、氢氧化铝吸附和层析法分离步骤。通过氢氧化铝吸附和复合模式层析介质分离两步，可以有效去除大肠杆菌表达系统中重组蛋白的内毒素，操作简单实用，符合规模化生产需求。采用本发明方法处理后的生物制品的VP2蛋白内毒素含量小于200EU/mL，且对VP2蛋白抗原活性无明显影响，安全性好，处理后的蛋白可在制备疫苗、药物类等生物制品中应用，解决了PPV疫苗生产中的核心技术问题。
一种去除大肠杆菌重组表达细小病毒 vp2 蛋白内毒素方法

[发明专利]与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用-CN201910949075.7有效
发明人：刘运超;张改平;陈玉梅;王方雨;尚延丽;魏蔷;冯华;刘东民;邢广旭;邓瑞广 -专利权人：河南省农业科学院;河南中泽生物工程有限公司
申请日： 2019-10-08 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C07K7/06 文献下载
摘要：本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SERWDN，即IBDVL9‑15。本发明利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振试验，结果表明，IBDVL9‑15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。
禽法氏囊病毒 vp2 蛋白特异性结合多肽序列及其应用

[发明专利]针对猪圆环病毒2型Cap蛋白的高亲和性多肽序列及其应用-CN201910146658.6有效
发明人：张改平;王方雨;邓瑞广;邢广旭;郝俊芳;卢清侠;赵东;滕蔓;柴书军;贾蕊;张浩 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2019-02-27 - 公布日： 2021-11-26 - 主分类号： C07K7/06 文献下载
摘要：本发明公开了针对猪圆环病毒2型Cap蛋白的高亲和性多肽序列及其应用，所述的多肽序列为KWWQSWEW。本发明基于猪圆环病毒2型Cap蛋白的晶体结构(PDB ID:3R0R)，通过分子对接虚拟筛选技术，获得一条可与猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性结合的多肽序列，其多肽序列为KWWQSWEW，即L6‑13。固相合成L6‑13，并与猪圆环病毒2型Cap蛋白进行亲和力鉴定，L6‑13序列与人工表达的PCV2 Cap蛋白之间相互作用的平衡解离常数KD为1.28×10‑7M，即128nM，说明亲和力较好。本发明设计而成的L6‑13序列与人工表达PCV2 Cap蛋白、人工接种PCV2均可以结合，与其它病毒蛋白均不发生交叉性反应，特异性较好。
针对圆环病毒 cap 蛋白亲和性多肽序列及其应用

[发明专利]一种口蹄疫病毒免疫抗体评价及感染与免疫鉴别诊断二联试纸条-CN201810797244.5有效
发明人：张改平;杨苏珍;孙亚宁;邢广旭;刘运超;王方雨;柴书军;邓瑞广 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2018-07-19 - 公布日： 2021-09-10 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明公开了一种口蹄疫病毒免疫抗体评价及感染与免疫鉴别诊断二联试纸条，该试纸条包括利用口蹄疫病毒VP1表位多肽人工抗原印制的检测线1，和利用口蹄疫病毒非结构蛋白表位多肽人工抗原印制的检测线2。本发明制备的人工抗原具有容易获得，结构稳定，纯度可达99％，成本低，可快速大量生产等优点，解决了传统表达蛋白表达量低，难以保证天然的空间结构，复性困难，难以除去菌体蛋白，影响检测结果的特异性等缺点，也解决了使用灭活病毒存在病毒灭活不全的风险。本发明还对金标垫进行预处理，更有利于金标垫吸水及金标蛋白的释放，有效解决现有试纸存在的金标蛋白释放慢且不完全，影响试纸产品检测准确性、灵敏度及保质期等问题。
一种口蹄疫病毒免疫抗体评价感染鉴别诊断二联试纸

[发明专利]一种口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物鉴别诊断试纸条-CN201810796792.6有效
发明人：张改平;孙亚宁;杨苏珍;杨继飞;陈鑫鑫;滕蔓;赵东;邓瑞广 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2018-07-19 - 公布日： 2021-07-30 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明公开了一种口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物鉴别诊断试纸条，该试纸条的检测线是利用口蹄疫病毒非结构蛋白表位多肽人工抗原印制而成，所选用的多肽为口蹄疫病毒非结构蛋白2B、2C、3B上3条表位多肽。本发明制备的人工抗原具有容易获得，结构稳定，纯度可达99％，成本低，可快速大量生产等优点，解决了传统表达蛋白表达量低，难以保证天然的空间结构，复性困难，难以除去菌体蛋白，影响检测结果的特异性等缺点，也解决了使用灭活病毒存在病毒灭活不全的风险。本发明还对金标垫进行预处理，更有利于金标垫吸水及金标蛋白的释放，有效解决现有试纸存在的金标蛋白释放慢且不完全，影响试纸产品检测准确性、灵敏度及保质期等问题。
一种口蹄疫病毒感染动物疫苗免疫鉴别诊断试纸

[发明专利]一体化自放大的间接竞争免疫层析试纸及检测方法-CN202110272751.9在审
发明人：杨苏珍;孙亚宁;胡骁飞;郭军庆;杨继飞;邢云瑞;邓瑞广;张改平 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2021-03-13 - 公布日： 2021-07-02 - 主分类号： G01N33/52 文献下载
摘要：本发明涉及一种一体化“自放大”的间接竞争免疫层析检测试纸，试纸包括支撑层、固定在支撑层上的吸附层和保护层；吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫一、结合垫二、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层；纤维素膜层上依次设置有检测线和质控线；结合垫一吸附有靶标物单克隆抗体，结合垫二吸附有纳米材料标记的人工抗原及纳米材料标记的生物素。该试纸抗体无需标记，加保护液干燥于结合垫一，避免了标记抗体过程中抗体的折叠及损伤，且可以精确的控制抗体用量；以纳米颗粒标记人工抗原作为探针，检测线上拦截的每个抗体都能精准结合两个标记抗原，实现了信号自放大，使免疫层析试纸的灵敏度更高。
一体化放大间接竞争免疫层析试纸检测方法

[发明专利]一种自放大精准控制的间接竞争免疫层析试纸条及应用-CN202110272753.8在审
发明人：孙亚宁;杨苏珍;郭振华;金前跃;杨继飞;胡骁飞;邓瑞广;张改平 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2021-03-13 - 公布日： 2021-06-25 - 主分类号： G01N33/558 文献下载
摘要：本发明涉及一种“自放大”、“精准控制”的间接竞争免疫层析检测试纸条，由试纸和样品杯两部分组成；试纸包括支撑层、固定在支撑层上的吸附层和保护层；吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层；纤维素膜层上依次设置有检测线和质控线；结合垫采用吸附有纳米材料标记抗原的玻璃纤维棉制成；样品杯为稀释样品用容器，样品杯内预固定有靶标物单克隆抗体。该试纸条将抗体独立干燥于样品杯中，避免了抗体标记过程中的折叠及损伤，并可精确控制抗体用量；以纳米颗粒标记人工抗原作为探针，检测线上拦截的每个抗体都能精准结合两个标记抗原，实现了信号自放大，从而提高试纸灵敏度。
一种放大精准控制间接竞争免疫层析试纸应用

[实用新型]新型SPF鸡隔离器-CN202021800867.2有效
发明人：柴书军;刘运超;罗俊;杨苏珍;李明;王方雨;冯华;魏蔷;张改平;邓瑞广 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2020-08-26 - 公布日： 2021-05-07 - 主分类号： A01K31/00 文献下载
摘要：本实用新型涉及新型SPF鸡隔离器，包括下箱体、上箱体及支架，下箱体的内部设有水平转动的输送带，在输送带的一端部设有刮粪条，在刮粪条的下方还有与其对应的导流槽，导流槽的下端伸入出粪口内，上箱体上的排气箱体的最里端设有初效过滤网，该初效过滤网固定在框体上，该框体通过挡板和固定旋钮将其压紧在排气箱体内部的延伸板上，上箱体的顶部还设有储水箱，该储水箱包括水箱体、和密封盖，水箱体和密封盖通过快速锁扣锁紧；本实用新型改进隔离器内鸡粪便的清理方式，及时将粪便、掉落饲料及脱落羽毛转移至隔离器外，同时改进鸡隔离器内初效过滤网的固定方式，便于拆卸更换，有效增加高效过滤器的使用时间，再者改进储水箱，避免饮用水二次污染。
新型 spf 隔离器

[发明专利]一条可与猪瘟病毒E2蛋白结合的亲和肽及其应用-CN201810416492.0有效
发明人：张改平;王方雨;邓瑞广;余秋颖;卢清侠;孙亚宁;郝俊芳;赵东;杨继飞 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2018-05-03 - 公布日： 2021-04-27 - 主分类号： C07K7/06 文献下载
摘要：本发明主要涉及一条可与猪瘟病毒E2蛋白结合的亲和肽及其应用，该亲和肽序列为HRKWKSKWK(P7)。本发明以牛病毒性腹泻病毒E2蛋白晶体结构为模板，同源建模获得猪瘟病毒E2蛋白的三维结构，借助虚拟分子对接技术，最终获得一条具有高评分值的多肽序列，即为P7；人工合成P7序列采用ELISA及SPR试验鉴定其与E2蛋白相互作用的亲和性及特异性，结果显示P7与E2具有较高亲和性及特异性结合；然后通过qRT‑PCR及IPMA试验验证其抑制病毒感染的活性，结果表明P7序列具有较好抑制猪瘟病毒感染PK‑15细胞的活性。本发明可为进一步研究病毒受体及抗病毒药物设计提供可靠的理论依据及新的思路。
一条猪瘟病毒 e2 蛋白结合亲和及其应用

[发明专利]一条抑制猪瘟病毒感染活性的多肽及其应用-CN201810416486.5有效
发明人：王方雨;张改平;邓瑞广;余秋颖;邢广旭;郝慧芳;孙亚宁;赵东;柴书军 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2018-05-03 - 公布日： 2021-04-23 - 主分类号： C07K7/06 文献下载
摘要：本发明一条抑制猪瘟病毒感染活性的多肽及其应用，该多肽序列为KRWWSHK(P8)。本发明以牛病毒性腹泻病毒E2蛋白晶体结构为模板，同源建模获得猪瘟病毒E2蛋白的三维结构，借助虚拟分子对接技术，最终获得一条具有高评分值的多肽序列，即为P8；人工合成P8序列采用ELISA及SPR试验鉴定其与E2蛋白相互作用的亲和性及特异性，结果显示P8与E2具有较高亲和性及特异性结合；然后通过qRT‑PCR及IPMA试验验证其抑制病毒感染的活性，结果表明P8序列具有较好抑制猪瘟病毒感染PK‑15细胞的活性。本发明可为进一步研究病毒受体及抗病毒药物设计提供可靠的理论依据及新的思路。
一条抑制猪瘟病毒感染活性多肽及其应用

[发明专利]依诺沙星单链抗体核心氨基酸序列及其应用-CN201910886304.5在审
发明人：张改平;王方雨;邢广旭;刘运超;杜加茹;胡曼;邓瑞广 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2019-09-19 - 公布日： 2020-10-23 - 主分类号： C07K7/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种依诺沙星单链抗体的核心氨基酸序列及应用，属于抗菌药物抗原检测领域。本发明借助于分子对接及虚拟筛选技术，在依诺沙星单链抗体晶体结构的基础上，通过分子对接技术，搜寻虚拟多肽库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为DSHYYGPWFAY和DGDTRYTQR。通过ELISA结合试验结果表明，依诺沙星单链抗体能够与相应靶标抗原有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对依诺沙星抗原进行定量和定性的快速检测；具有操作简单、省时省力和费用低等优点。
依诺沙星单链抗体核心氨基酸序列及其应用

[发明专利]针对PCV2高感染性的PK15细胞系及其制备方法和应用-CN201710137225.5有效
发明人：李鹏;张改平;王选年;王利平;李青梅;郭军庆;金前跃;邓瑞广;万博;刘肖 -专利权人：新乡学院
申请日： 2017-03-09 - 公布日： 2020-07-31 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了针对PCV2高感染性的PK15细胞系及其制备方法和应用。本发明通过对PK15细胞进行克隆，提供了一种获得高感染性、高均一性的单克隆细胞系的方法：1.培养感染PCV2的不均一的PK15细胞系；2.通过有限稀释法把PK15细胞充分稀释，加入到96孔细胞培养板中，使每孔含有0.5个细胞；3.然后扩大培养；4.通过IFA检测每个单克隆细胞株对PCV2的易感性；5.对单克隆细胞进行稳定性培养。获得了一株PK15‑2G9细胞株感染PCV2的强度远远高于PK15亲代细胞，从而为以后PCV2疫苗及诊断研究奠定了基础。
针对 pcv2 感染性 pk15 细胞系及其制备方法应用

[发明专利]基于天然免疫库筛选识别氧氟沙星单链抗体的多肽序列及应用-CN201910886320.4在审
发明人：王方雨;张改平;邓瑞广;刘运超;牛艳;郝俊芳;张颍硕;徐倩 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2019-09-19 - 公布日： 2019-12-13 - 主分类号： C07K7/06 文献下载
摘要：本发明涉及基于天然免疫库筛选识别氧氟沙星单链抗体的多肽序列及应用，属于抗菌药物抗原检测领域。本发明借助于分子对接及虚拟筛选技术，在氧氟沙星单链抗体晶体结构的基础上，通过分子对接技术，搜寻虚拟多肽库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为FNWDFAY和YGYPH。通过ELISA结合试验结果表明，氧氟沙星单链抗体能够与相应靶标抗原有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对氧氟沙星抗原进行定量和定性的快速检测。
氧氟沙星单链抗体多肽虚拟筛选分子对接技术定量和定性靶标蛋白多肽配体多肽序列结合能力结合试验晶体结构抗菌药物抗原检测快速检测多肽库抗原亲和力靶标可用搜寻应用

[发明专利]精确识别新霉素的单链抗体关键序列及应用-CN201910886323.8在审
发明人：王方雨;张改平;赵东;冯华;牛艳;郝俊芳;杨继飞;邓瑞广 -专利权人：河南省农业科学院
申请日： 2019-09-19 - 公布日： 2019-12-13 - 主分类号： C07K7/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种精确识别新霉素的单链抗体关键序列及应用，属于抗菌药物抗原检测领域。本发明借助于分子对接及虚拟筛选技术，在新霉素单链抗体晶体结构的基础上，通过分子对接技术，搜寻虚拟多肽库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为LSEDYEDY和VLDSDGK。通过ELISA结合试验结果表明，新霉素单链抗体能够与相应靶标抗原有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对新霉素抗原进行定量和定性的快速检测。
新霉素单链抗体多肽虚拟分子对接技术定量和定性靶标蛋白多肽配体关键序列结合能力结合试验晶体结构抗菌药物抗原检测快速检测多肽库抗原亲和力靶标可用搜寻筛选应用

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