本发明属于化学催化与酶催化交叉领域,涉及氨基酸脱氢酶突变体及其应用,具体涉及有机合成、枯草芽孢杆菌亮氨酸脱氢酶(leucine dehydrogenase from B.subtilis,BsLDH)的突变改造、底物α‑酮酸及其衍生物的不对称还原氨化,以及手性非天然氨基酸的化学‑酶法连续反应制备过程。本发明公开的突变体,能够催化多种α‑酮酸类化合物的立体选择性还原氨化,合成结构多样的非天然氨基酸。该突变体基因经过重组、转化,在E.coli Rosseta(DE3)中表达,并将其与葡萄糖脱氢酶(GDH)组成辅酶循环体系用于催化α‑酮酸及其衍生物得到手性非天然氨基酸。同时,本发明以甲基酮类化合物为起始原料,构建了立体选择性制备手性非天然氨基酸的化学酶法反应过程。