本发明公开了一种重组腺相关病毒样颗粒、其构建方法及抗结核疫苗。所述重组腺相关病毒样颗粒由三种蛋白组装形成,分别为AAV2VP1、AAV2VP3和AAV2VP2基因与结核杆菌CFP10‑ESAT6基因融合表达蛋白;其中,所述AAV2VP2基因具有SEQ ID NO:1所示序列或其增加或截短的序列,所述结核杆菌CFP10‑ESAT6基因具有SEQ ID NO:2所示序列或其增加或截短的序列。本发明提供的以腺相关病毒样颗粒(AAVLP)为载体的新型抗结核疫苗,安全性更高且能够诱导机体产生强烈的体液和细胞免疫反应,而且,生产工序更简单,成本更低。